[求助]细胞转染

最新回复

• hold住 (2012-4-24 15:56:00)

  
  一般可以的。具体看你是用什么细胞什么方法进行转染。

• ritou1985 (2012-4-24 15:56:21)

  
  我用的是L02细胞呢，在网上查好像脂质体法转染比较好是吧？这样操作的话细胞存活的可能是多少呢？

• glass (2012-4-24 15:57:09)

  我用的是L02细胞呢，在网上查好像脂质体法转染比较好是吧？这样操作的话细胞存活的可能是多少呢？
  
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  能一直活，如果不活，是你养的问题……

• mickeylin (2012-4-24 15:57:57)

  
  我的细胞和你不一样，脂质体对细胞有毒性，所以需要摸一个合适的比例，选一个转染效率比较高细胞损伤小的条件

• zwsyrt (2012-4-24 15:58:32)

  
  请教一下问题：1：能不能加大转染试剂和质粒在总体系中的比例？
  2：在确定筛选浓度以后，能不能使用高于这个界限的筛选浓度？
  3：在转染以后，可不可以进行传代操作？以利于目的细胞的生长。
  谢谢！

• abc816 (2012-4-24 15:58:54)

  什么叫做转染试剂和质粒在总体系中的比例？
  多了有可能会毒死细胞
  
  通常是最低致死剂量往上加一两级
  
  转染以后尽快筛选单克隆

• zwsyrt (2012-4-24 15:59:41)

  
  你好！1：也就是说共500ul的体积，其中有60ul是转染试剂和质粒及无血清的df12的量；能不能把后者的量提高1到3倍？
  2：如果质粒转进细胞的话，它所带的抗性得到表达，用高于致死剂量的话，所得到的目的细胞不是更纯吗?
  3：筛选单克隆的培养液是加药物或是不加？

• pencil菲 (2012-4-24 16:00:08)

  
  转染试剂+质粒+df12=60ul? 另外540ul是什么？
  就是要在致死量往上高一两级，但不会太高，我个人觉得一方面没必要浪费药物，阳性细胞耐受性可能也有一定限度，另一方面，表现抗性也不一定就意味着目标蛋白表达，也许只有抗性基因部分重组进去，还是需要western之类筛目标基因高表达株
  要加

• owanaka (2012-4-24 16:00:35)

  
  同意楼上群友的观点。
  其实没有必要加大比例，一是会对细胞有影响，二是浪费药物。
  转染后如果细胞密度很大，可以进行传代操作。
  还有其他人建议，可以对转染后的细胞再进行一次转染。这个方法没试过，不知道可行与否

• idea2011 (2012-4-24 16:00:58)

  
  谢谢指导！我用的24孔板，按照转染试剂的要求总体积每孔500ul，呵呵

• 3648755 (2012-4-24 16:01:49)

  请教一下问题：1：能不能加大转染试剂和质粒在总体系中的比例？
  2：在确定筛选浓度以后，能不能使用高于这个界限的筛选浓度？
  3：在转染以后，可不可以进行传代操作？以利于目的细胞的生长。
  谢谢！
  
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  你的意思是不是做稳转呢？
  稳转G418筛选可以传代的