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[求助]心肌细胞培养用血清选择:选无支原体还是无噬菌体？
[求助]心肌细胞培养用血清选择:选无支原体还是无噬菌体？
我要养乳鼠心肌细胞，然后移植治疗心肌梗死！
在查血清使用的过程中，一个问题始终没有解决，同时帖子里提到的很少，就是大家都说用胎牛血清好，但是对于是用无支原体的胎牛血清，还是用无噬菌体、低内毒素的太牛血清，并没有讨论，故在此提出，请大家解惑，谢谢！
下面是我在杭州四季青网站上获得的资料：
无噬菌体、低内毒素系列牛血清是采用能100％杜绝微生物等外源因子污染的，制备无噬菌体、低内毒素牛血清用原料牛血生产工艺生产，其特征为无噬菌体。内毒素含量极低(≤5EU/m1)，超过国际先进水平。
1． 无噬菌体、低内毒素特级胎牛血清： 本品采自出生前胎牛，3次0．1um过滤。无噬菌体。内毒素含量极低(≤5EU/m1)， 超过国际先进水平。极佳的促细胞生长繁殖效果。
细胞生长(快)曲线峰值 1.6x106
细胞倍增时间(短) ≤16小时
细胞克隆率(高) ≥85％
适合：细胞株的保藏及娇贵细胞株(如昆虫细胞、淋巴细胞)的培养。
2． 无噬菌体、低内毒素优级胎牛血清： 本品采自出生前胎牛，3次0.1um过滤。无噬菌体。内毒素含量极低(≤5EU/m1)， 超过国际先进水平。极佳的促细胞生长繁殖效果。
细胞生长(快)曲线峰值 1.4x106
细胞倍增时间(短) ≤17小时
细胞克隆率(高) ≥80％
适合： 细胞株的保藏及组织器官培养、单抗研制。
无支原体系列牛血清是采用无支原体的牛血清制备工艺，3次0.1um过滤。100％确保无支原体污染，特别适宜对支原体有严格要求的科研和生产用户。
1． 无支原体特级胎牛血清： 本品采自出生前胎牛，3次0.1um过滤。极佳的促细胞生长繁殖效果。
细胞生长(快)曲线峰值 1.6x106
细胞倍增时间(短) ≤16小时
细胞克隆率(高) ≥85％
适合： 娇贵细胞株(如昆虫细胞、淋巴细胞)的培养。
2． 无支原体优级胎牛血清： 本品采自出生前胎牛，3次0.1um过滤。极佳的促细胞生长繁殖效果。
细胞生长(快)曲线峰值 1.4x106
细胞倍增时间(短) ≤7小时
细胞克隆率(高) ≥80％
适合：组织器官培养、单抗研制。
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最新回复
chuntian1983 (2012-4-29 17:22:40)
个人认为，应该根据培养细胞的用途来选择。
噬菌体、内毒素进入生物体内有可能激发免疫系统，所以用于移植的细胞培养。
单纯细胞实验，选用无支原体的。
园丁## (2012-4-29 17:23:59)
没养过心肌细胞，请版内有经验的战友介绍一下！
dog002 (2012-4-29 17:24:33)
噬菌体、内毒素进入生物体内有可能激发免疫系统，所以用于移植的细胞培养。
单纯细胞实验，选用无支原体的。
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我培养心肌细胞的目的就是为了移植！那我就选择买低内毒素、无噬菌体的血清了。
也有很多战友用的是gibco的特级胎牛血清，不知gibco的血清是否也有无支原体和无噬菌体之分！
dog002 (2012-4-29 17:24:58)
刚刚又查了gibco的胎牛血清，觉得已经灭活过的血清Fetal Bovine Serum, Certified, Heat-Inactivated 比较符合我的要求。
理由主要是因为我养细胞的目的是用于移植，这需要尽可能小的降低移植细胞的免疫原性，而
1.噬菌体、内毒素进入生物体内有可能激发免疫系统，所以用于移植的细胞培养,如果单纯细胞实验，选用无支原体的。（by dongwp管理员）。
2.gibco说明上写Heat-Inactivated 的血清especially suited to immunological work(我翻译为 特别适用于免疫学的研究工作），同时Undergoes special biochemical/hormonal profileand bacteria tests. Guaranteed low endotoxin (≤ 10 EU/ml) and low hemoglobin (≤ 15 mg/dl).
fei1226com (2012-4-29 17:25:30)
不一样的！！！
灭活是针对血清中的补体，说明书讲的适合免疫学实验，是防止补体系统的作用影响实验结果。
噬菌体、内毒素进入体内会激活受体的免疫系统，促进排斥反应，导致移植细胞被攻击。
dog002 (2012-4-29 17:26:00)
灭活是针对血清中的补体，说明书讲的适合免疫学实验，是防止补体系统的作用影响实验结果。
噬菌体、内毒素进入体内会激活受体的免疫系统，促进排斥反应，导致移植细胞被攻击。
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对补体系统不了解。
刚刚以“补体系统”为关键词查找，有一个帖子是“【求助】补体系统在慢性肾移植排斥中的作用”，我想补体系统和移植是有关系的，但是是什么关系呢还不知道，是促进排斥反应，还是抑制排斥反映，我会再查文献的，也希望有这方面知识的战友帮助？
买一个血清还真难呢，不过我很高兴，都说实验准备的时间很长，现在相信了！
yapuyapu (2012-4-29 17:26:42)
补体系统属体液免疫的一部分，当抗体与细胞表面的抗原结合后，补体参与在细胞膜“打洞”，导致细胞死亡。
胎牛是还没有出生的牛，没有呼吸和进食，所以本身不含有“杂抗体”。没有抗体，补体就不起作用，因此，灭活于否关系不大。如果是免疫学实验，加有其它免疫细胞或血清，其携带的抗体可能会激活补体系统，导致细胞死亡，从而影响实验结果。比如混合淋巴细胞培养。
eric930 (2012-4-29 17:27:27)
胎牛是还没有出生的牛，没有呼吸和进食，所以本身不含有“杂抗体”。没有抗体，补体就不起作用，因此，灭活于否关系不大。如果是免疫学实验，加有其它免疫细胞或血清，其携带的抗体可能会激活补体系统，导致细胞死亡，从而影响实验结果。比如混合淋巴细胞培养。
再次感谢！
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1.选低内毒素和无噬菌体的胎牛血清用于培养要用来异种移植（大鼠到香猪）的心肌细胞基本可以确定，单从内毒素的角度考虑的话，国产的四季青血清“内毒素含量极低(≤5EU/m1)“，而gibco血清含量 “low endotoxin (≤ 10 EU/ml)” ，从这一点看，确实超过国际先进水平。
2.对于补体，我的理解不一定正确，还请dongwp管理员指正。我的理解是：从补体的角度来看，胎牛血清的补体要发挥作用，必须外源性抗体刺激。我要把心肌细胞异体移植到猪心中，那么猪心中携带的抗体就是对于心肌细胞而言就是外源性的，可能就会激活移植鼠心肌细胞的补体系统，导致细胞死亡。（当然，移植进去的心肌细胞对于猪心而言整个都是异物，肯定要排斥的）。那么是否可以这样理解，我用灭活过的胎牛血清就可以减少一部分排斥反应呢？如果是这样的话，用已经灭活的血清就比较好。
3.如果上述推断合理的话，那么就可以选择国产的四季青低内毒素血清，然后我自己灭活（不知道四季青有无灭活过的血清，总觉得公司的专业灭火要比我灭活的要好一些，所以才想买灭活过的血清）。
is2011 (2012-4-29 17:31:13)
可以选择国产的四季青低内毒素血清，然后自己灭活，四季青应该有灭活过的血清。
以上仅仅是从免疫学角度考虑。对细胞生长的影响，进口的血清比较稳定，国产的差异较大，可能得到的商品与说明书的描述不完全吻合。
is2011 (2012-4-29 17:31:39)
在查血清使用的过程中，一个问题始终没有解决，同时帖子里提到的很少，就是大家都说用胎牛血清好，但是对于是用无支原体的胎牛血清，还是用无噬菌体、低内毒素的太牛血清，并没有讨论，故在此提出，请大家解惑，谢谢！
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以前的细胞培养，通常是单纯的细胞实验，所以对噬菌体、内毒素没有要求。现在各种细胞的移植都在兴起，所以有了无噬菌体、低内毒素的产品。
中华医学会还新创了《中华细胞与干细胞移植 (电子版)》杂志》，欢迎投稿！
中华细胞与干细胞移植（电子版）为中华医学会主办的移植专业学术电子期刊，是一本在载体形式上与纸媒体相互补的多媒体光盘期刊（CD-ROM）。
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吴才子 (2012-4-29 17:32:05)
不管怎么样,实践是检验真理的唯一标准.
有问题我会再来讨论的!
谢谢!
101010 (2012-4-29 17:33:07)
我购买的是gibco的新生牛血清，但是是新西兰产地的，按照常规灭活之后，分装，但是最近细胞状态不好，所以我就单独培养了一下分装好的血清，放在心新的培养瓶内，看到瓶内有会动的黑点。而且数量还不小，请问这是被污染了还是灭活之后的悬浮？？？？因为肉眼看似乎不很透亮，但是也不知道是不是污染。
听说国外的新生牛血清，比起他们的胎牛血清少了一些处理，据说可能有时候有些细胞会不适应，真的是这样么啊？？？？
有人遇到这样的问题吗？？？
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