[求助]细胞传代后不贴壁的问题

最新回复

• 101010 (2012-5-02 12:41:04)

  用10-25ug/ml的多聚赖氨酸包被培养瓶，然后将未贴壁的细胞进行转接到多聚赖氨酸包被培养瓶。

• 49888 (2012-5-02 12:41:27)

  
  我昨天按照赖氨酸的操作说明做了，但今天我去看细胞怎么还是没贴壁啊！楼上能不能详细说明一下啊，非常感谢！

• 铜雀 (2012-5-02 12:41:59)

  
  楼主 我估计你的细胞可能已经死了 贴壁细胞过了一定时间还没有贴壁 可能就已经死了 。 你的细胞没有贴壁我怀疑可能是你细胞消化之后没有绝对静置在培养箱一定的时间 （简单的说就是细胞贴壁之前有人挪动了你的细胞，而导致刚刚要贴壁的细胞又被晃动了，导致无法再贴壁） 所以细胞消化之后一定最少10个小时之后才能去动，否则就会导致细胞贴壁太少，或者不贴壁。有些贴壁较慢的细胞在消化之后要绝对静置16小时以上） 如果是原代细胞，那就应该静置48小时再去换液观察。这点千万要注意。

• idea2011 (2012-5-02 12:42:25)

  楼主 不知你的细胞是刚复苏的还是培养一段时间了 如果是刚复苏的次日换液体培养24小时观察看看一定有贴壁的 如果是正生长的细胞建议你重新复苏吧

• vera+ (2012-5-02 12:42:47)

  
  1、不知道您的是什么细胞，我养的293细胞就是半贴壁的，在操作台上一会就悬浮起来了，放在37度培养箱里又可以自己贴壁，这类细胞操作起来要小心点，PBS等要事先预热，并且用pbs洗的时候或者加培养基的时候要沿着培养皿滴进去，避免直接冲到细胞上。
  2、若您的细胞以前培养是贴壁的，并且贴壁比较牢的话，可能是消化过度了，针对一些贴壁不是很牢的细胞，我一般是用pbs洗后，加入0.25%的胰酶，晃动培养皿使其全部覆盖住细胞，然后马上吸去胰酶，在镜下观察，等细胞之间有缝隙的时候就可以终止消化
  仅供参考
  祝 实验顺利

• jujuba (2012-5-02 12:43:07)

  
  降低胰酶浓度或终止消化后离心弃上清，再加培养液洗涤一次。