[求助]MTT法 点板均匀性

最新回复

• owanaka (2012-5-03 15:00:39)

  
  买个排枪就解决了，排枪也不贵，３００ul容量足够了。

• windy+++ (2012-5-03 15:00:56)

  
  我也出现过这样的问题，老板建议我不要一排加到底，c采用之字形加法，这样能够保证每一组都是均匀的，减少组间差异

• tianmei001 (2012-5-03 15:01:14)

  
  我用两个方法减小这方面的误差，1是在15ml离心管混匀细胞悬液后，每次都把枪插入到液面下距液面和管底差不多中间位置，这样即使随着细胞沉淀你每次吸取的也都是中间值，第2个就是"S"形加液，从A1--A12--B12--B1--C1这样子加，以减少不同行间的误差。

• zhenxin (2012-5-03 15:01:35)

  看了以上各位的发言，感觉自己好土啊 ~~
  俺就是每次都将细胞尽量吹吸均匀，点板的时候，每点一孔之前都晃晃细胞瓶，以此尽量保证悬液的均匀。这样每次都摇匀的话，细胞沉降几乎可以忽略不计。
  这样做大部分时候结果还是比较好的，不过每次操作毕竟有差异，有时结果确实不好。
  如果用排枪的话，需要先将细胞悬液放在一面积比较大的容器内，如此一来，摇匀的时候可能不如在细胞瓶里摇得更匀一些，而加一块板需要加12次~~如果加的板多的话，个人认为可能不如一孔一孔加总体上更均匀一些~~
  总之，这个问题确实很难说，国际上也没什么通用标准，各位高手都来说说自己的点子吧~~

• cj_mondy (2012-5-03 15:04:13)

  我建议:
  在将细胞接种至96孔板时用100mL输液瓶配制细胞悬液, 由于100mL输液瓶体积较大, 摇动时, 细胞悬液不会溢出, 加样时,可右手握加样枪加样, 左手握住装细胞悬液的100mL输液瓶一直微微地轻轻摇动(保证输液瓶中细胞处于混悬状态), 并且加样时, 枪头与96孔板保持垂直, 枪尖距离孔底很近但不接触孔底, 这样细胞悬液滴会从孔底中央向底缘铺开, 孔底细胞铺展均匀。
  另外, 建议看看园子中的相关帖子。
  祝实验顺利!

• vera+ (2012-5-03 15:04:35)

  有排枪至少快一些吧
  不过我们实验室一直是用普通的枪一下下加的
  也挺好
  
  基本上就是细胞悬液按终体积20~25ml，可以用25ml的细胞培养瓶稀释
  每次加样之前用枪吹打均匀，晃动瓶子
  之字形加样或者与给药组垂直方向加样（如果横着设剂量组就竖着加细胞悬液）
  尽量使用一个枪头，枪头扎紧些
  
  刚开始做的时候都觉得自己加的不一样多，做多了就好了

• vivian4123 (2012-5-03 15:04:55)

  我使用的是青霉素小瓶6ml左右
  操作起来，每种完10个孔时吹打以下
  随机种板，熟练后就不会加错了（呵呵，经常加错）
  自己很懒，一般都是横向的加，速度够快的话，测出来的数据还是很让人满意的。
  祝成功

• HPLC使者 (2012-5-03 15:05:14)

  1.点板时的细胞一定都要是单个细胞，不能有成团细胞存在。
  2.细胞计数后，根据你要求的细胞密度，在无菌的小培养瓶或烧杯中配好细胞悬液，用移液枪吹匀（枪头埋入液面中，从下至上旋转向上轻轻吹匀，不要伸出液面，以免产生气泡），操作过程中记得要带无菌手套。
  3.点板时让枪头靠在孔壁上，轻轻地让细胞液顺壁而下。
  4.点板过程中，要一边振摇烧杯，点板过程要尽量迅速。
  5.点板时按照正常的从上至下，从左至右顺序即可，都点好后十字交叉轻轻振摇一下96孔板即可。
  如果楼主是同时点几块板，每点完一块后，要用移液枪重新吹匀剩下的细胞液，建议配制的细胞悬液在三块以内使用。
  MTT法的重复性不是很好，建议楼主不要太苛求实验数据的完美性！
  祝楼主实验顺利！

• bohe221 (2012-5-03 15:05:42)

  谢谢前辈们。采用这个方法也是环境限制。看来还是要多练才行。再次感谢！