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[求助]紧急求助凋亡、流式高手！实验结果可行么？
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构建带有GFP的真核表达载体，目的蛋白为GFP融合蛋白！
稳定转染到Hela细胞中，通过Annexin-FITC/PI检测其凋亡情况！
现在发觉GFP与FITC荧火为同一通道，但本实验对照组为GFP空载，检测结果GFP空载组几乎没凋亡，实验组凋亡明显。该实验结果可行么？编辑会不会刁难？
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最新回复
fsdd817 (2012-5-08 15:47:01)
“检测结果GFP空载组几乎没凋亡，实验组凋亡明显”， 你是怎么区分 FITC和GFP的？ 如果细胞同时被标记FITC和GFP，另外一些细胞只有GFP，能够区分开吗？只是荧光强度不同，来区分吗？我个人认为是有问题的。
flower-201 (2012-5-08 15:47:47)
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是稳定转染，所有检测细胞都带有GFP，俺导师说可行。呵呵、、、、
如果GFP干扰，对照组应该有显著凋亡才对，因为空载的GFP荧光更强（在荧光显微镜下看到！）
理论上该设计是不缜密的，哎！想用其它荧光标记重做，但导师都开口说行，那就OK咯！
glass (2012-5-08 16:07:33)
区分不开，我前几个周给一个老师上机的时候，就是同样的问题，同一通道的，不可行，之后请教了我们老板，也说不可行
不解...
dongdongqiang (2012-5-08 16:07:54)
我的细胞也有gfp，测凋亡的时候没考虑到这一点！郁闷啊！
想买个其他荧光素标记的试剂盒重做！Annexin V-APC凋亡检测试剂盒这个盒子好像可以！
你买吗？
要是买的话能分我5次不？
呵呵
谢谢了！
ending (2012-5-08 16:08:19)
不解...
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我的可以啊，GFP空载压根没有凋亡啊！（在荧光显微镜看到明显绿色，western blot也检测到啊！）
ending (2012-5-08 16:10:03)
想买个其他荧光素标记的试剂盒重做！Annexin V-APC凋亡检测试剂盒这个盒子好像可以！
你买吗？
要是买的话能分我5次不？
呵呵
谢谢了！
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我最多用Hoechst/PI再做一下！
ending (2012-5-08 16:10:50)
不解...
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我知道理论上是不可行的，但实际上我做出来了！
viviwang1987 (2012-5-08 16:11:39)
那个做凋亡的Annexin V-APC凋亡检测试剂盒做五次就够了吗?万一实验失败了,应该要做很多次来摸索哟,我是新手,从来没做过,有没有人能回答我的问题?
ladyhuahua (2012-5-08 16:12:16)
GFP与Annexin v同是绿色，FITC通道，光看凋亡率就要用GFP的细胞去调阴性，然后上机Annexin v标记细胞，就像你说的理论上不可以，但实际上还是有些差别的，如果你要用不带GFP的调阴性就不可行
xueyouzhang (2012-5-08 16:17:23)
我这里的流式不能测Hoechst染色的！
另外：带gfp的细胞用Annexin v-fitc真的可以吗？用带gfp的细胞调阴性可以吗？流式测的是荧光的有无，还是荧光量的多少啊？
mickeylin (2012-5-08 16:19:19)
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明白，歪打正着，就是用空载GFP稳定细胞株调阴的！嘿嘿，放心了！
mickeylin (2012-5-08 16:19:52)
我这里的流式不能测Hoechst染色的！
另外：带gfp的细胞用Annexin v-fitc真的可以吗？用带gfp的细胞调阴性可以吗？流式测的是荧光的有无，还是荧光量的多少啊？
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流式Hoechst出不来？
我没有买Annexin-V-APC！
66+77 (2012-5-08 16:20:44)
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我没有买Annexin-V-APC！
我这里的流式细胞仪没有安装360的激光通路！所以就不能测Hoechst了！
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