PCR技术在基因工程中的重要意义

　　聚合酶链式反应，简称PCR。聚合酶链式反应，其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有 DNA,RNA的地方.聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，简称PCR)又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。

　　PCR技术能快速特异地在体外复制目的，理论上能将其量极微的(fg DNA)目的基因在较短的时间内(1-2小时)扩增到极易检测的微克水平。

　　PCR技术目前已经成为人们获得目标基因的最常用的方法之一。然而其基本原理并不复杂，主要包括模板DNA(目标DNA)加热变性;降温后反应混合物中特异性引物与单链DNA模板的复性;72℃条件下，Taq酶诱导引物借助模板信息由5’端到3’端延伸。每一轮反应，模板拷贝数都增加一倍，理论上n次循环后，扩增产物拷贝数为2E(n-1)。但在PCR反应后期由于底物的消耗，Taq酶活力的下降，PCR抑制物的增加，PCR反应的指数形式逐渐转化为线性形式进入扩增的平台期，实际上30-35个循环，扩增倍数一般可达百万倍。如果想再提高扩增产物的量，可以将产物DNA再稀释1000倍作为新的模板进行第二轮的PCR扩增，一般二次扩增后的DNA数量已达到所有分子生物学操作的要求。

　　PCR技术问世以来正以惊人的速度发展，不仅其本身不断地优化改进，许多新型的PCR技术或由PCR衍生的新技术正不断出现。在PCR技术的启发下，诸如转录依赖的扩增系统(TAS)、连接酶链反应(LCR)、自主序列复制系统(3SR)、链替代扩增(SDA)、循环探针反应、等温扩增系统等核酸体外扩增技术不断诞生。当然，目前Mullis发明的经典PCR技术，仍是多数实验室进行核酸体外扩增时的首选和最常用的技术。