可溶性纤维连接蛋白对SGC-7901细胞中PKA活性的影响

摘要　　本研究通过向SGC-7901细胞中加入可溶性纤维连接蛋白(fibronectin， FN)探讨可溶性纤维连接蛋白对PKA活性的影响。实验采用蛋白印迹技术检测可溶性FN在不同浓度及作用时间情况下对PKA Ca亚基表达水平以及PKA作用底物血管扩张刺激磷蛋白(vasodilator-stimulated phosphoprotein，VASP)磷酸化水平的影响; 采用免疫荧光技术检测可溶性FN对PKA作用底物p-VASP分布的影响。结果显示， 在SGC-7901细胞中， 可溶性FN在0.5~8 mg/ml浓度区间内， 对PKA活性存在剂量依赖性抑制效应; 选取1 mg/ml可溶性FN作用12 h以后， 可溶性FN对PKA活性存在时间依赖性抑制效应; 同时， 我们建立了能够稳定表达人甲状腺A激酶锚定蛋白(human thyroid AKAP， Ht31)肽段的SGC细胞， Ht31破坏PKA锚定后， FN对PKA活性的抑制作用消失; 免疫荧光显示可溶性FN可以使VASP磷酸化位置聚集于细胞边缘。因此， 我们认为在SGC-7901细胞中可溶性FN对PKA活性存在抑制作用， 这种抑制效应与可溶性FN的浓度及作用时间呈正比且取决于PKA能否正常锚定; 可溶性FN可以影响PKA活化位置。