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标题:[求助]3t3-l1分化问题求助

wood533[使用道具]
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发表于 2012-5-22 14:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]3t3-l1分化问题求助


小女子刚开始做3T3-L1分化成脂肪细胞，发现撤换胰岛素后容易卷边，不同程度都有，有的干脆全漂啊，而且分化率不高。
我用的DEX和胰岛素都是国产的，用的是小牛血清。看文献都是胎牛血清，和SIGMA的胰岛素和DEX，IBMX。
请有经验的高手现身，给小女子上上课，自己摸索着做了一阵，发现不行啊。培养一次要十几天，看他们漂，我也很难过，而且实验没法推进下去，也比较急。

谢谢做过的达人出来传授下经验，在此先谢谢了，呵呵。
为这些细胞分化，觉也睡不好，怕自己毕不了业
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abc816[使用道具]
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发表于 2012-5-22 14:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

首先换培养液的时候要小心点。
分化诱导时，如果分化两次则细胞贴壁比较紧。
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-5-22 14:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问楼上的，分化2次是指加二次诱导剂嘛？谢谢
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dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2012-5-22 14:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我认为是的，两次诱导
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dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2012-5-22 14:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

偶也在做，觉得操作时一定要小心，否则养了好久的细胞就挂了，很是心疼。试剂嘛，这个试验，最好用进口的，国产的不能保证质量。
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发表于 2012-5-22 14:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以直接分化诱导3天，也可以在第二天时换液,再分化诱导2天.
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-5-22 14:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上的再请教一下，按照你说的方法加了2次诱导剂，倒是不卷了，但是出现了一团一团的细胞，并且出现棘装的细胞，以前加一次诱导剂的时候没有的。请问啥原因啊？不胜感激，万分谢谢！！！
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nn255[使用道具]
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发表于 2012-5-22 14:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问您还在培养3T3-L1细胞吗?能否分我一瓶?谢谢!
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发表于 2012-5-22 14:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

出现棘状后，更换细胞液继续作分化诱导促进没有？继续分化促进4天左右，看能否出现脂肪滴。
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2012-5-22 14:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有条件的话还是换新的细胞重新培养吧。
我也遇到过，虽然分化诱导3天后面能有脂肪细胞，但是分化的不是太好。
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