[求助]培养液颜色很快就会发黄

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• jujuba (2012-5-24 13:41:18)

  可用颜色判断添加有酚红的培养的大概PH值：PH为6.5的为黄色，PH为7.0的为橙色，PH为7.4的为红色，PH为7.6的为粉红，PH为7.8的为紫色。而大多数细胞的最适PH值为7.4左右。
  楼主的培养基很快呈黄色说明培养基呈酸性，说明：1、细胞过量生长。2、细菌污染。3、培养箱中CO2浓度过高。个人认为：（1）是不是细胞过量生长了？（楼主是否给了处理因素：测DNA时比以前偏高）（2）须要排除一下培养箱中CO2的浓度问题。看是否浓度过高。

• yysr238 (2012-5-24 13:41:45)

  首先我的细胞接种密度和之前是一样的，不会增殖，应该不存在过量生长的吧；培养箱还有别家的细胞，但他们的培养液颜色未出现明显变化；我提取细胞的方法和所用的试剂和之前成功时是一样的；另外，我发现换为不含血清的培养基后，颜色不会变化这么快。
  我该怎么办呀？急盼!

• kulee (2012-5-24 13:42:04)

  
  建议你改为密闭培养，看颜色变化是不是还这么快
  ph变化快的原因无非以下几种：
  1.co2张力不对
  2.培养瓶塞拧得太紧
  3.缓冲体系缓冲力不足
  4.培养液中盐浓度不正确
  5.细菌、酵母、真菌等污染
  不过像你说的支原体污染的话ph不会很明显

• yysr238 (2012-5-24 13:42:28)

  
  我使用的培养板，不是培养瓶；如果是二氧化碳张力不对，那为什么同在一个培养箱的别人的培养液没有出现我这种情况；还有就是我现在换为无血清培养液后，颜色不会变化那么快了。
  明天就要测细胞DNA含量了（荧光微量测定），真得好担心呀。

• pencil菲 (2012-5-24 13:42:51)

  是不是培养液的问题，配制时间多长了，群友说的有道理，缓冲体系中是否加了Hepes。可以尝试换一下新配制的培养液，或用别人的培养液试试。看一下结果如何。

• lagua123 (2012-5-24 13:43:14)

  
  我也遇到了跟版主一模一样的问题，测过变黄的培养液的PH在7.0左右，我用的DMEM/F12培养基，里面本来就有HEPES的，后来我又加了一些，细胞种到板子中还是会变黄。所以考虑不是HEPES的问题。我的培养液是新配的。
  后来试过用不加血清的培养液，发现不变黄，所以判断是血清的问题。
  继续排除原因，又试了含有血清的培养基加到没有用多聚赖氨酸铺板的板子里，发现也不会很快变黄，所以判断我们用的多聚赖氨酸也有问题了，可能时间有点长，因此打算把PPL也换掉。
  进一步的实验我还没有开始，因为我订的老鼠还没有到位，所以不知道换了血清和PPL之后还会不会这样。tiantianapple战友可以试试跟我一样的方法排除一下。我之前用的是复蒙的血清，下一次改用进口血清了。

• yysr238 (2012-5-24 13:43:34)

  
  我用的培养基也是D/F12，PAA公司的，我做过培养基的培养发现不会很快变黄的；马血清和胎牛血清也是PAA公司的。
  前一段用的也是这些呀，为什么现在就会出问题呢？我的血清是分装好的呀。找不到原因好痛苦呀。
  明天要收细胞测定DNA了，好担心。。。。。。

• TAT (2012-5-24 13:43:57)

  不要担心哦，担心也没有用的，现在关键的问题是从多方面排除原因，解决问题呢……实验本来就是会出现这样那样的问题的……要加油哦

• yysr238 (2012-5-24 13:44:16)

  昨天测过DNA含量和蛋白了，DNA还是有问题，
  下次试验我换换培养基和血清试一试