盘基网柄菌中gp150 分子相互作用蛋白质的分离及分析

摘要　　在大肠杆菌BL21 (DE3)中表达编码盘基网柄菌中gp150 蛋白C末端的基因， 得到含有gp150 蛋白C 末端肽段及6 个组氨酸标签的融合蛋白。通过镍柱亲和层析纯化得到纯度在90%以上的目的蛋白， 用于免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。所得抗体经Western blot 检测有较好的抗gp150 的特异性， ELISA 法测定效价达1∶128 000 后用于免疫共沉淀， 从发育16 h 的盘基网柄菌细胞全蛋白中成功分离出两个与gp150 蛋白相互作用的蛋白质。通过质谱分析鉴定， 分别为40S ribosomal protein S3 (RPS3)蛋白和40S ribosomal protein S24 (RPS24) 蛋白， 两蛋白在细胞周期调控、细胞发育及凋亡过程中有着重要作用。实验结果提示在盘基网柄菌多细胞发育中gp150 蛋白可能与RPS3 和RPS24 发生相互作用， 借此调节了细胞分化和发育。