[求助]胰酶消化后胰酶要倒掉再终止吗?

最新回复

• duoduo (2012-5-28 12:49:10)

  
  【1】理论上来说可以不倒掉的。因为培养液中的血清可以终止胰蛋白酶的消化作用。所以说可以不倒掉。
  
  【2】在实际操作中，主要是看个人习惯。不管怎么样，胰蛋白酶都会对细胞产生一定的影响的（尽管理论上来说血清可以终止胰蛋白酶的消化作用）。所以，我在操作中都是倒掉培养液。但是，有些时候，我可能同时消化几瓶细胞的。所以，有的时候就消化的时间长了，如果把胰酶倒掉，可能很多细胞就同时倒掉了，这时我就不倒掉了，直接加培养液。
  
  【3】总结一下，倒掉和不倒，细胞都能活。我一般来说还是倒掉。

• duoduo (2012-5-28 12:51:41)

  
  一般都是倒掉的，虽然新培养基中的血清可以终止消化，但是残留在培养基中还是不太好的。
  碰到贴壁不牢或依次消化很多瓶时，我一般都会不等消化完全就会将胰酶吸掉，让残留的胰酶继续消化，最后加全液终止，这样即不会过消化弃胰酶导致细胞丢失，也不会导致残留量很大！

• whitesheep (2012-5-28 12:52:03)

  
  可以不倒掉的,血清可以终止胰蛋白酶的消化作用.

• eric930 (2012-5-28 12:52:30)

  
  一般都是倒掉的，再加培养基(含10%血清)终止消化．

• idea2011 (2012-5-28 12:52:53)

  
  我觉得还是要到的，因为我同时做过倒掉和不到掉的细胞，观察他们的生长状态，我发现还是倒掉的细胞长的好，建议倒掉。

• S6044 (2012-5-28 12:53:21)

  
  请问各位，你们有做皮肤成纤维细胞原代培养的么？

• S6044 (2012-5-28 12:53:58)

  
  可否与我交流一下，我现在正在做人皮肤成纤维细胞的培养呢，用贴壁法没有细胞爬出来，现在找不到原因了，大家有谁做过，可否与我交流一下心得？

• rxcc33 (2012-5-28 12:54:24)

  那个做成纤维细胞培养的战友 你是用什么方法做的 我正在做 还是比较好做的
  我给你两种方法：
  1：贴壁法。优点是省钱，缺点是费时间
  将表皮切成小块，放在一次性的培养皿中 在超净台中用高速风吹干，然后加入DMEM（10％FBS） 放培养箱中【培养，大约3天后 成纤维细胞从边缘爬出，大约9天后 把表皮全部扔掉，然后待细胞长满培养皿。用胰酶消化 转入培养瓶中培养
  2：消化法：优点是省时间 缺点是花钱多
  用DiapeaseII 消化皮肤（4度过夜），表皮真皮分离，用I型胶原酶消化真皮40分钟，100目过滤，离心1000转5分钟。去上清。讲沉淀转入培养瓶中 三天换液 6天传代 以后每3天传一代 也是用DMEM

• HPLC使者 (2012-5-28 12:54:51)

  
  我觉得如果细胞比较容易贴壁就可以不倒掉，待细胞贴壁后及时用D-HANKS洗涤并更换新鲜培养基即可。