[求助]稳定 转染，载体是否也随目的片段整合到基因组上

最新回复

• gemei0115 (2012-5-28 13:01:47)

  
  整合啊，要不怎么筛选阳性克隆啊！我的载体是有G418抗性基因的，所以用G418筛选，最后得到的就是阳性克隆，然后再用RT-PCR鉴定的。既然你的细胞本身也表达这种蛋白，你可以通过蛋白定量比较稳定转染的细胞啊。也可以用你的标签来检测！

• +小生怕怕+ (2012-5-28 13:02:17)

  
  谢谢，楼上的，载体都有5千多bp，还是有电大的，如果都整合到基因组上的话，会不会因为太大而影响目的蛋白的活性，或基因的稳定性那，谢谢。

• zhezhe (2012-5-28 13:02:41)

  
  我的载体也是5千多，目的基因300kb。稳转获得的细胞表达情况不是很强（细胞以前不表达该蛋白）。不稳定的基因或者影响大的应该都在筛选过程中被淘汰了，呵呵，我是这样理解的，不知道对不对。

• +小生怕怕+ (2012-5-28 13:03:03)

  
  我找不到确定的答案,继续求助,谢谢