[求助]THP-1对CO2的依赖性有多大?

最新回复

• ladyhuahua (2012-5-28 16:10:47)

  
  和其他细胞一样，要把瓶口悬松。建议看看《细胞培养实验指南》普及一下

• kulee (2012-5-28 16:11:08)

  
  “大家”如果也是做细胞培养的，应该知道这个基本常识
  如果不想松盖，可以在培养液中添加HEPES。

• xue258 (2012-5-28 16:11:33)

  QUOTE:

  原帖由 kulee 于 2012-5-28 16:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  “大家”如果也是做细胞培养的，应该知道这个基本常识
  如果不想松盖，可以在培养液中添加HEPES。

  请教LS的老师，培养液中添加了HEPES，是否就一定要拧紧瓶盖？松盖有影响吗？谢谢！

• 园丁## (2012-5-28 16:12:04)

  QUOTE:

  原帖由 xue258 于 2012-5-28 16:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  
  请教LS的老师，培养液中添加了HEPES，是否就一定要拧紧瓶盖？松盖有影响吗？谢谢！

  看一下下面的帖子，HEPES起到稳定培液PH值的作用，与瓶盖松紧无关！dongwp老师的意思是，如一定要拧紧瓶盖，加HEPES有助于维持培液PH相对稳定些。建议楼主不要拧紧瓶盖，细胞生长过程中也需要充足的氧气和气体交换～ 小心把细胞憋死啊 论坛里细胞培养方面的资源很多呀，建议新学细胞培养的战友搜索一下，先学好基础知识！
  cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=9673024&sty=3&keywords=HEPES%D7%F7%D3%C3')

• ending (2012-5-28 16:12:47)

  
  版主们说的很对，应该拧松些。但是还要注意：THP细胞很特殊，对低pH依赖性很强，偏酸环境生长迅速，添加hepes平衡好些，还是建议买商品化1640（主要因为无内毒素）。
  还有就是不能总是移动和拿出观察，尤其是传代初期，可能是增殖需要自身旁分泌物质。切忌急躁，一般传代后要耐心等3天，等培养基偏黄（pH值低）了细胞就会大量扩增。传代时也不要全换新的培养基，要半量换液（还是旁分泌的原因）。

• yueban-1147 (2012-5-28 16:13:04)

  
  楼上的商品化1640（主要因为无内毒素），什么意思啊？
  我最近用天润善达的瓶装1640液，测细胞因子正常对照组老是偏高，是不是内毒素污染啊？
  谢谢！

• utt0989 (2012-5-28 16:14:27)

  
  自己配的培养基，很难避免内毒素掺入，商品化的工艺相对严格些。但是一些国产厂家的可能就不一定行了。尤其是包装工艺不一定合格。
  我们用的一直是Gibco的，还不错，细胞因子本底很低。你说的情况很可能是内毒素污染。

• BUK (2012-5-28 16:15:03)

  你好！
  你养细胞时一些玻璃器皿如吸量管、吹打管都干烤了吗？
  放在250度烤箱里4个小时可以灭内毒素，你是这样做的吗？
  谢谢！

• 二子 (2012-5-28 16:15:27)

  
  做了，但是配制时添加的NaHCO3，滤器，滤膜等等恐怕很难干烤，有什么其他好的去内毒素方法？我是觉得很难避免，也许我们条件还是不行

• 二子 (2012-5-28 16:16:17)

  
  太谢谢大家了.我还有个问题,我现在的细胞状态不是很好,长的很慢,培养液也黄了,可细胞密度不够,先前在网上看到的贴子不是说总换掖对THP-1不好吗,每次换液都需要离心.对于这种情况大家有什么好的建议吗?还有Sayid说THP-1细胞一般传代后3天细胞会长的很快,是不是如果细胞生长速度正常,从细胞传代后到下一次传代都不要换液啊.再次谢谢大家.

• 二子 (2012-5-28 16:16:34)

  
  如果哪位正好也在培养THP-1细胞,是否可以上传一张高倍镜下的照片啊.我的细胞状态不好,周围也没人养过此细胞,刚买的细胞,上网也没看到有此细胞高倍镜下的照片.大家有养的好的帮帮忙吧.我已经在网上上传过我细胞的照片了.

• jrwyyplt (2012-5-28 16:16:56)

  你好！
  你不是买的商品化液体1640吗？怎么还自己配呢？“配制时添加的NaHCO3，滤器，滤膜”难道商品化的1640买回来也需要添加东西吗？还要过滤吗？你做的细胞因子本底很低吗？我的本底跟LPS刺激时差不多，很郁闷啊！
  谢谢答复！

• skytree (2012-5-28 16:17:57)

  
  呵呵，几天没来，不知道楼主的细胞怎么样了？如果到现在还是没怎么长，你也可以考虑买点进口胎牛血清了，我们用国产的养了很久都不怎么长，换了胎牛血清就好多了。
  
  回复：我多数培养基是自己配啊，就是免疫相关的细胞才用进口的。
  
  照片(别人的)，自己没相机在手

  
  81378684.snap.jpg

• xue258 (2012-5-28 16:18:26)

  以前的细胞里面一直有细沙似的东西,好象还能蠕动,这样的细胞还养着两瓶,武大已经又寄了细胞,细胞比上次状态好点,没细沙,但是长的慢.我给武大打电话询问,他们也不知道怎么回事,我用的四季清的血清,浓度都加到了20%了.