RNA干扰抑制nm23-M1基因表达对骨髓瘤SP2/0细胞增殖的影响

摘要　　建立RNA干扰(RNA interference， RNAi)抑制nm23-M1基因表达的骨髓瘤SP2/0细胞株， 初步探讨nm23-M1基因对小鼠骨髓瘤细胞增殖的影响。针对nm23-M1 mRNA序列设计3个小干扰RNA (small interfering RNA， siRNA)序列， 分别构建表达这3个序列及阴性对照序列的pGenesil-1重组质粒， 再转染小鼠骨髓瘤SP2/0细胞并经G418抗性筛选稳定表达细胞株。采用半定量RT-PCR及Western印迹检测3个重组质粒对nm23-M1 mRNA及蛋白质表达的抑制效果， 然后用MTT法观察抑制nm23-M1表达对SP2/0细胞增殖的影响。结果显示， 设计的3条siRNA不同程度地特异抑制骨髓瘤SP2/0细胞nm23-M1 mRNA及蛋白质的表达， 其中siRNA-2抑制作用最强， 其对nm23-M1 mRNA和蛋白质的抑制率分别为74.4％和62.1％; 且siRNA-2抑制nm23-M1基因表达后SP2/0细胞增殖受到明显抑制(P<0.05)。本研究成功构建了pGenesil-1-nm23-M1 siRNA重组质粒， 筛选出稳定抑制nm23-M1基因表达的SP2/0细胞株， 提示抑制nm23-M1基因表达有抑制骨髓瘤细胞增殖的作用; 为进一步研究nm23基因的生物学功能及临床应用打下了基础。