[求助]MTT OD值

最新回复

• 爱老虎游tt (2012-5-29 10:52:26)

  MTT的质量对OD值的影响很大,最好用好一点的MTT.

• misswu61 (2012-5-29 10:53:04)

  
  可能是细胞密度太大了

• 2541 (2012-5-29 10:53:23)

  
  孵育时间是否过长？细胞密度大，加入MTT后孵育时间过长，都会导致OD值偏高。

• 铜雀 (2012-5-29 10:55:30)

  
  我一般是细胞在96孔板中大约长至90%时加入药物处理，作用12小时后加入MTT处理4个小时，再加入DMSO。
  细胞密度过大，你们一般用多少密度的细胞呀？如果是这样的话，细胞长至50%左右就可以加药处理了吗？

• 园丁## (2012-5-29 10:55:57)

  ......
  刚开始的细胞吸收值总是大于2，后面渐降......
  我想问，如何才可以控制在0.7以下，请支招。
  
  ——————————————————————————————————————————————————————————————
  
  问题1. 后面渐降, 是指药物处理组下降, 还是OD值不稳定?
  问题2. OD值在0.2-0.8之间是比较理想的, 不是必须控制在0.7以下.
  
  建议:
  1. 加DMSO前将孔内培养液尽量弃干净, 排除培养液的干扰.
  2. 每孔接种细胞数保持一致, 一般1000-10000. 检测时长满70-80%比较理想. 如果您用的是细胞毒性药物, 不推荐50%的细胞量, 药物组细胞数会更少,结果可信性下降.
  3. 一般每孔加MTT10 uL, 溶解用的DMSO是100-150 uL.细胞密度大时, 可适当增加DMSO量, 相当于稀释OD值便会下降.
  4. 加DMSO后, 可通过震荡/抽吸/37度培养箱放置溶解结晶等方式溶解完全,均匀.否则会出现OD值不稳定.

• 铜雀 (2012-5-29 10:56:19)

  
  谢谢版主，后面渐降, 是指药物处理组下降, 组内的OD值很稳定的，差别不大。

• 园丁## (2012-5-29 10:57:04)

  
  药物处理组下降,说明药物作用有效, 趋势是好的啊.
  如果方法都没问题, 最大的可能是细胞密度过大. 个人的经验:加MTT检测时细胞大约1万/孔(此时密度适当, 未长过, 处于对数生长期)OD值是比较理想的(每孔加10uLMTT, 37度 4小时后弃上清, 每孔加DMSO100uL).
  另外, 别忘了 设立三个空白对照复孔, 即不加细胞, 其余同实验孔. 得到本底值, 分析数据时各组平均值均要减去本底均值.
  祝成功!

• greenbee (2012-5-29 10:57:25)

  楼上分析很好，我感觉还和细胞的对数生长期及药物干预时间长短有关，如果细胞分裂周期较短、药物干预时间较长，细胞的初始密度最好控制在5000个每孔以下。另外OD值是一个绝对值，不便于重复实验之间的比较（尤其每次接种细胞数不等的情况下），可以通过计算抑制率来反应药物的有效性。

• 铜雀 (2012-5-29 10:57:48)

  
  楼上的各位分析的有道理，本实验已重复多次，组间变化还是较大的，而且趋势也较明显，唯一的一点就是OD值没有在线性范围内，但我想通过抑制率来计算来说明问题了。现在我将细胞数控制少一点，再做一次，已传了细胞，今晚加药。明天知道结果，呵呵。谢谢各位!

• 铜雀 (2012-5-29 10:58:05)

  
  楼上的各位分析的有道理，本实验已重复多次，组间变化还是较大的，而且趋势也较明显，唯一的一点就是OD值没有在线性范围内，但我想通过抑制率来计算来说明问题了。现在我将细胞数控制少一点，再做一次，已传了细胞，今晚加药。明天知道结果，呵呵。谢谢各位!