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[分享帖]细胞培养经验

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2012-5-30 11:58    作者: birdfish    来源: 分析测试百科网

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[分享帖]细胞培养经验
我从1月份培养细胞以来，
一直都是不顺利的。
其中首先原因是没有人带，全是自己摸索！
其次我是认为主要是个人操作问题。
现在我的细胞是疯长，累的不行，
下面将个人经验总结如下：
1 如果财力允许，培养基一定要买已经配好的，
因为ph值对细胞影响很大，
‘并且很多时候对于新手来说，即使细胞培养失败你是找不出合理的理由的。所以尽最大可能减少不稳定因素的影响！
2 我通过实践证明培养基最好是DMEM与1640混合再一起使用，
比例大概就是1：1,这样你会发现即使培养多种细胞你只需这一种培养基就可以完全应付了！
3 我总体认为培养基最好不要加抗生素，
首先它对细胞有影响，其次很容易失效。
其实我们细胞室相当简陋，并且应用的人还是很多的。
4 灭过菌的东西最好是一周内使用，
超过时限就需要再一次灭菌！！！
5 对待细胞的态度一定好，这样它才会好好对你。
就这些了，希望对大家有所帮助！
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最新回复

  • nn255 (2012-5-30 11:59:15)


    培养基最好还是分开配制
    含糖量不同，而且DMEM含有1640没有的两种成分，如果细胞要求高，可能培养结果不理想，请慎重对待

  • birdfish (2012-5-30 12:00:14)

    你估计是没有看清楚我的意思，
    我是说买好的培养基混在一起使用。
    这样效果比单一要好！
    就是因为DMEM和1640有些成分是互补，甚至增强的！

  • kuaizige (2012-5-30 12:00:40)

    培养基不一定需要买配好的哦,因为我开始用已经配好的培养基不但细胞养不出来,而且培养基还莫名其妙的变黄,后来我自己配的,其他操作不变,细胞长出来了.

  • misswu61 (2012-5-30 12:01:06)


    最好分开用，除非特殊要求

  • viviwang1987 (2012-5-30 12:01:32)


    pH对细胞的影响很大,但是不同的细胞对pH值要求也不同,购买已经配好的培养基并不能解决这个问题,灭过菌的东西4度放一个月都没有问题,你出现了问题可能是你灭菌不完全,再者,细胞培养对水的要求很高.

  • cj_mondy (2012-5-30 12:01:50)


    pH对细胞的影响很大,但是不同的细胞对pH值要求也不同,购买已经配好的培养基并不能解决这个问题,灭过菌的东西4度放一个月都没有问题,你出现了问题可能是你灭菌不完全,再者,细胞培养对水的要求很高.

  • milkdog (2012-5-30 12:02:17)


    短时间内保存细胞怎么办啊,还得冻存吗?

  • junhun (2012-5-30 12:02:34)


    我前面培养嗅鞘细胞是用的乳鼠，嗅球，培养出来的细胞很少，不过没加培养基没加牛垂体提取物和腺甘酸环化酶激活剂，现在我买上这两种，加入1：1的DMEM/F12的10%胎牛血清培养基中，不知能否大量繁殖，那位有经验，望赐教。静待佳音！！！

  • birdfish (2012-5-30 12:03:35)

    短时间内保存细胞怎么办啊,还得冻存吗?

    ————————————————————————————————————

    你培养细胞过程中，
    如果暂时不想培养，只能冻存啊！
    要不你怎么还能让他停止不长？
    我只能告诉你还是冻存吧，要不既然时间不长，你就还是培养着。

  • milkdog (2012-5-30 12:04:19)


    pH和温度关系很大，所以配培养基调酸碱度时一定要看当时的温度

  • birdfish (2012-5-30 12:04:39)

    既然对大家还是有一些帮助，那么我还是继续抛砖引玉！
    上一个帖子：http://www.dxy.cn/bbs/post/view? ... amp;tpg=1&age=0
    6 还是关于培养基，如果不是买液体的，那么
    其ph问题一定要给予充分重视！！！
    配置过程中的调解我就不说了，能用ph计最好！
    7 其次关于培养基的保存，如果你有输液瓶，那么我建议你每一次打开以后，最好还是换一个胶塞。
    如果象我一样就是普通培养瓶，那么记得一定要用封口膜封口，不要担心封口膜会带来更多的污染！你可以先将封口膜在使用前开紫外时略微照一下！
    但是保存封口膜最好找一个密封的瓶子等，比如吃完糖的罐子。
    8 培养基中最好还是加好所需血清保存，这样使用比较方便。
    当然不是所有的培养基，而是2周左右可以使用完的量啊！

    下面说说传代：
    9 细胞传代的时候胰蛋白酶量要做到最少但是有效果就可以，
    这样对细胞的伤害时最小的。
    我一般加入的量恰好将将够铺满整个瓶底。
    另外消化完成也就是晃动瓶子时有沙粒状大片脱落，
    需马上加入含有血清的培养基中止消化！
    有人这样直接传代，我认为效果不是很好，因为这时
    血清被用来种子胰酶且瓶中还有胰酶损伤的细胞，
    所以我还是一贯主张离心完在传代。
    10 既然说到了离心，那么一定要平衡你的培养瓶。
    关于离心机平衡的重要性我应用下面这个帖子吧。
    原载于 散人笔记
    原文地址 http://www.eryi.org/blog/post/centrifuge-rpm-to-rcf.html
    11 离心完以后去掉旧的培养基，加入新鲜培养基（含血清）。
    然后用滴管一定要吹打均匀在传代！！！
    我在培养HEPG2此种细胞不易消化且不易分散，但是成团对其影响很大。
    今天就先这么多了，希望大家能关注啊！

  • loli (2012-5-30 12:05:08)


    支持楼主！您说得很有帮助。我是新手，准备做hepG2，楼主能介绍一下 一些经验吗？关于消化传代方面的，听说hepG2容易成团。谢谢
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