[求助]MTT的若干问题

最新回复

• sunnyB (2012-5-31 11:49:34)

  
  上清应该吸出来，小心点吸，
  做实验前要无血清24小时
  我只能回答2个问题，第三个不知道怎么答，希望对你有用

• 101010 (2012-5-31 11:49:56)

  1、加MTT孵育4h后离心，上清液应该吸出来还是甩出来？貌似做的时候甩了一次把蓝色结晶都给弄出来了，吸出来有点麻烦。
  上清应该慢点吸出来，千万别吸上来，因为MTT测的就是这种紫色物质溶于DMSO后的OD值，甩出来的话很容易就把结晶物质给甩出去，影响试验结果，我一般用200的枪缓慢吸。
  2、血清会对OD值有影响，弃上清后要不要再往各孔加水或者其他洗一下，再离心弃上清？
  血清对OD值会有一定的影响，但影响不是很大，一般做MTT用5%的血清以减少血清对OD值的影响。如果你的药物与MTT没有反应，没有必要专门洗一下，吸干净上清后直接加DMSO溶解。
  3、加DMSO蓝色结晶充分溶解后在各孔底有不少白色沉淀出现，好像是细胞渣，不处理会不会对结果有影响
  有白色沉淀出现？没有碰到过这种情况，看看是不是自己的操作手法问题，对结果肯定有影响，会造成你的OD值变大。个人做MTT的经验，希望能对你有所帮助。

• hyuu (2012-5-31 11:50:24)

  最好不要甩.
  我是先用枪轻轻吸取上清液,残留于底部的液体不用再过分吸取(因为不小心就会吸出蓝色结晶).
  然后把板子反扣在卫生纸(叠厚点)上,自然吸干.效果很好喔.

• laughing妹 (2012-5-31 11:50:48)

  
  请问使用的卫生纸要不要紫外消毒一下啊 ？

• wmp1234 (2012-5-31 11:51:20)

  卫生纸不用消毒，干了以后就加DMSO溶解后就测了，没有活细胞，卫生纸消毒没用

• xueyouzhang (2012-5-31 11:51:46)

  效果好像不错，
  我也试一试的。
  我想知道给药之前细胞还用饥饿嘛？
  还有就是一般都是多长时间给药，
  给药后多长时间检测啊？

• 66小飞侠 (2012-5-31 11:52:11)

  QUOTE:

  原帖由 xueyouzhang 于 2012-5-31 11:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  效果好像不错，
  我也试一试的。
  我想知道给药之前细胞还用饥饿嘛？
  还有就是一般都是多长时间给药，
  给药后多长时间检测啊？

  我是种好细胞24h后,换含0.5%血清的培养基再饥饿24h,然后给药.
  给药时的培养基中血清含量换成2.0%.
  给药后,检测三个时间:24h,48h,72h.也就是一次种三块板子.

• 66小飞侠 (2012-5-31 11:52:51)

  
  当然不同的细胞和药物的实验条件不同,可以自我变通.

• pencil菲 (2012-5-31 11:55:28)

  
  呵呵，干吗要用枪吸，用注射器吸不就好了