[求助]MTT实验结果的困惑

最新回复

• kewanqi2011 (2012-5-31 13:18:22)

  
  1 我很想知道你的“高浓度的adriamycin（>20ug/ml)不能抑制细胞的增殖”
  是不是就是od值过大？？？
  如果是的，那么很有可能是药物颜色的影响。
  2 我的结果一直都是高浓度抑制，
  次于高浓度的在某一时间却可能是“促进”，
  我也一直很郁闷的。
  3 做一个完全是adriamycin与mtt的，看是不是也有吸收？

• bamboo16 (2012-5-31 13:18:45)

  QUOTE:

  原帖由 kewanqi2011 于 2012-5-31 13:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  1 我很想知道你的“高浓度的adriamycin（>20ug/ml)不能抑制细胞的增殖”
  是不是就是od值过大？？？
  如果是的，那么很有可能是药物颜色的影响。
  2 我的结果一直都是高浓度抑制，
  次于高浓度的在某一时间却可能是“促进”，
  我也一 ...

  1 就是od值较大，我也怀疑是药物颜色的影响，正在检测完全是adriamycin时是否有吸收。

• ha111 (2012-5-31 13:19:02)

  
  有可能是你所用的药物在高浓度是会对MTT有一定的还原作用所导致的，建议你在加MTT之前先将用药物处理了一定时间的培养液全部吸弃，用不含药物的新鲜培养基混合MTT一起加入，然后再按照正常操作。

• yysr238 (2012-5-31 13:19:29)

  要做对照孔
  每种药物浓度分别都有“种细胞组”和“未种细胞组”
  用来去除药物本身的颜色影响

• superboy (2012-5-31 13:19:50)

  你的药物颜色对吸光度有很大影响，需要做一个药物的对照孔，即培养基加药物（不加细胞），检测方法一样，最后用药物处理组吸光值减去药物对照组吸光值，而你的control 组最终要减去空白对照组（即只加培养基的孔，也叫零孔），最终抑制率=1-（药物处理组OD值-药物对照组OD值）/（control 组OD值-空白对照组OD值）。

• bamboo16 (2012-5-31 13:20:14)

  你的药物颜色对吸光度有很大影响，需要做一个药物的对照孔，即培养基加药物（不加细胞），检测方法一样，最后用药物处理组吸光值减去药物对照组吸光值，而你的control 组最终要减去空白对照组（即只加培养基的孔，也叫零孔），最终抑制率=1-（药物处理组OD值-药物对照组OD值）/（control 组OD值-空白对照组OD值）。
  
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  药物对照孔检测的时候，是加入MTT孵育后直接测吸收，还是孵育后吸去上清，加入DMSO后测吸收。两者好像吸收值差别很大，不知道该用哪个？

• bamboo16 (2012-5-31 13:20:32)

  
  你可以把你的高浓度的药在各个波长通道下跑一下流式，看看是不是有自发荧光。

• leifengta (2012-5-31 13:20:50)

  
  请问如果加入MTT 之前把先前的培养基全部吸掉，再加入新鲜的培养基加入MTT的话，那么 ，被药物作用死掉的细胞有可能已经漂起来，已经漂浮在培养基中了，这样做的话是不是会使结果不准 ，偏低啊？

• bamboo16 (2012-5-31 13:21:13)

  QUOTE:

  原帖由 leifengta 于 2012-5-31 13:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  请问如果加入MTT 之前把先前的培养基全部吸掉，再加入新鲜的培养基加入MTT的话，那么 ，被药物作用死掉的细胞有可能已经漂起来，已经漂浮在培养基中了，这样做的话是不是会使结果不准 ，偏低啊？ ...

  不一定全吸出来，200ul的体系你可以吸出100，而且吸出前要离心一下。

• leifengta (2012-5-31 13:21:39)

  请问离心的作用是？离心的沉淀怎么处理呢？