[求助]关于Abeta处理的SH－SY5Y细胞

最新回复

• kuaizige (2012-6-06 12:46:45)

  
  我现在没分化细胞，也没有灭活血清，以后的实验再视情况而定。emily1979，有空可以PM我，大家做的难得这么接近！

• woshituzhu (2012-6-06 12:47:20)

  我也是从协和细胞中心购买的细胞，不晓得她的细胞是否已分化，我不知道用Abeta处理的SH－SY5Y细胞，是否需要SH－SY5Y细胞化。但是我查相关文章发现，我用某种保护性药物来对抗Abeta的损伤作用，文献中要求用未分化的细胞。另外，我想请教：用Abeta损伤细胞时，你是否使用无血清的培养基，我用Abeta1-40作用于sh-sy5y，当使用含血清的培养基时，细胞无明显凋亡;当使用无血清的培养基时，未加药组在光镜下也出现了凋亡。我设置的浓度是5和10微膜尔每升，细胞接种浓度250000个每毫升，作用时间24小时。下一步您有何高见，或者我是否可以参考您的做法，毕竟Abeta1-40太贵了，最好少走弯路。望赐教。

• fei1226com (2012-6-06 12:52:14)

  
  我也在做Abeta处理SH－SY5Y细胞
  然后流式分析
  可以切磋下

• 49888 (2012-6-06 12:52:55)

  
  对于这个实验，我是用amyloid 25-35处理的。融解amyloid的时候要用无菌水，千万不能用生理盐水等，只要一有盐，蛋白根本就不会溶。这个蛋白我买的是 sigma的，1mg要一千多很贵，但国内便宜的我买了，根本就没有活性。
  造模的时候，细胞不需要分化，但接种的密度要合适，不能太高，密了做不出毒性来。浓度的话25uM足够，24小时。
  
  amyloid的聚集速度相当快，我没有经过老化，发现在加药后2小时内，细胞的形态已经发生变化。细胞会发生褶皱，细胞表面还能见到聚集的簇状蛋白，但没有蛋白聚集的地方，细胞的形态变化不大。
  
  以上是我做这个模型的一点体会。

• kuaizige (2012-6-06 12:53:28)

  请问：你用96孔板还是75毫升培养瓶造膜，细胞接种密度是多少？是sh-sy5y细胞吗

• kuaizige (2012-6-06 12:54:23)

  
  加amyloid 1-40需要孵育吧，你一般需要孵育几天？你之后打算做western吗

• tieshazhang (2012-6-06 12:54:50)

  请问：你用96孔板还是75毫升培养瓶造膜，细胞接种密度是多少？是sh-sy5y细胞吗
  
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  当然是96孔板，培养瓶的话，你想想要用多少a-beta,你能用得起？

• kuaizige (2012-6-06 13:19:03)

  
  用96孔板接种密度是多少？我要测caspase-3细胞量太少，western无条带