【分享】高效液相色谱仪使用总常见的问题和解决的方法

　　高效液相色谱(High Performance Liquid Chro—matographv.HPLC)是近3O年发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离、分析技术。

　　它既能用于微量组分的分析测定.又能用于大量的制备分离.灵活多样，应用范嗣已超过其它各种分离方法.高效液相色谱仪在使用过程中常会出现一些影响分析结果的问题.

　　如果使用人员了解常见问题及其成因和相关解决方法.就能做到勤维护早预防.使分析结果保持较好的稳定性与较高的精确性

　　1 高效液相色谱仪系统

　　液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成(见图1)。对于整个系统而言.柱子、泵和检测器是核心部件.同时也是易出问题的主要部位。

　　2 常见问题及解决方法

　　高效液相色谱仪作为一种高精密仪器.如果在使用过程中操作不当的话.就容易导致一些问题.其中最常见

　　的就是柱压问题、漂移问题、峰形异常问题。

　　2.1 柱压问题

　　柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关 所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值.而是指压力波动范围在345kPa以内(在使用梯度洗脱时。柱压平稳、缓慢的变化是允许的)。压力过高、过低都属于柱压问题。

　　2.1.1 压力过高

　　这是高效液相色谱仪在使用中最常见的问题.指的是压力突然升高.一般都是由于流路中有堵塞的情况。此时.我们应该分段进行检查。

　　① 首先断开真空泵的人口处.此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶.看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下.则是溶剂过滤头堵塞处理方法：用3O% 的硝酸浸泡0.5h.在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下.溶剂过滤头正常，再检查。

　　② 打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤头堵塞。处理方法：将过滤头取

　　出.用1O% 的异丙醇超声30min 如果压力降至690kPa以下.过滤头正常.再检查。③把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95% 的水冲至压力正常：如果是一些强保留的物质导致堵塞.则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常 假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降.则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上.用流动相冲洗柱子 这时.如果柱压仍不下降，只有换柱子人口筛板。但一旦操作不慎.很容易造成柱效下降.所以尽量少用

　　2.1.2 压力过低

　　压力过低的现象一般是由于系统泄漏.处理方法：寻找各个接口处.特别是色谱柱两端的接口.把泄漏的地方旋紧即可 当然还有一个原因就是泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低.更严重一点会导致泵无法吸进液体。处理方法：打开Purge阀.用3～5ml/min的流速冲洗.如果不行.则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出

　　2.2 漂移问题

　　主要包括基线漂移和保留时间漂移

　　2.2.1 基线漂移

　　一般说来.机器刚启动时.基线容易漂移.大概要30min的平衡时间， 如果用了缓冲溶液或缓冲盐，还有就是在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长，但如果在实验过程中发现基线漂移，

　　2.2.2 保留时间漂移

　　保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志，同一种东西.两次的保留时间相差不要超过15s，超过了30s可看做保留时间漂移，就无法进行定性，峰形问题是液相的主要问题.在做液相过程中，我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰形，对于各种各样的异常峰，要区别对待，从主要问题出发，逐一加以解决(见表3)。

　　3 结语

　　以上只是对液相色谱常见的问题进行了分析.当然在实际应用中还会遇到更多的问题，在排除故障时要遵守以下原则：一次只改变一个因素，确定假定因素与问题之间的联系：如果通过更换组件来排查故障时要注意将拆下的完好组件装回原位，避免浪费;养成良好的记录习惯.这是成功进行故障排除的关键。总之.在使用高效液相色谱仪时一定要注意样品的前处理与仪器的正确操作和保养。