RNA干扰抑制肾小管上皮细胞TSP1表达和TGF-β1活化

摘要　　血小板反应蛋白1 (TSP1)是转化生长因子-β1 (TGF-β1)体内重要的活化因子，而后者又是致肾小管间质纤维化的关键因素。观察了针对TSP1的小双链干扰RNA (siRNA-TSP1)， 抑制由血管紧张素II (AngII)诱导的肾小管上皮细胞TGF-β1过度活化。将根据人TSP1基因序列设计的特异siRNA-TSP1转染人肾小管上皮细胞系(HK-2)，利用Western印迹、RT-PCR、流式细胞仪及ELISA等方法， 检测了 TSP1、 TGF-β1及其信号蛋白Smad2与p-Smad2、纤维连接蛋白(FN)和纤溶酶原激活剂抑制物-1(PAI-1)的基因转录水平、蛋白质表达或蛋白质活性。结果显示， siRNA-TSP1能有效转染HK-2细胞，并以剂量依赖方式显著抑制TSP1的基因转录与合成；其对TGF-β1的合成影响较小，但能明显抑制TGF-β1的活化。此外siRNA-TSP1可阻抑TGF-β1依赖的Smad2磷酸化，减少细胞外基质FN以及PAI-1的合成。研究结果提示，由于TSP1是TGF-β1重要的内源性活化因子， 故针对TSP1的RNA干扰能在体外有效抑制TSP1表达并相应调抑了TGF-β1的活化。