[讨论帖]原代细胞培养

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• idea2011 (2012-6-08 15:21:15)

  观察细胞污染首先要从培养液的外观来看，看培养液是否清亮。刚刚加入培养液是看不出来的，需经过隔夜培养或更长时间才能看出来。如果培养液变混浊，则可断定细胞污染。其次，是从显微镜下观察，因细菌很小，所以观察时眼睛盯住一个视野，你会看见细小的黑点在动，细胞是不会动的，因此，可以断定那就是细菌。
  
  污染是细胞培养中一个大敌，一旦污染，前功尽弃。一定要有强烈的无菌意识，操作中要求自己严格遵守操作规程。
  每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室30分，用酒精擦手，台面，不消毒的器械（如移液枪、废液缸等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处进行；使用无菌台后，再用酒精擦全台。
  要做到绝对无菌，不太可能。但可以做到最大限度的减少含菌量。使用完的东西尽快移出无菌台。另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序。

• mickeylin (2012-6-08 15:21:32)

  
  谢谢，我还有个问题就是我的DMEM培养液里加了双抗，是配培养基的时候就加的，然后过滤，在冰箱里是不是会降解啊？

• 黄花菜 (2012-6-08 15:22:02)

  
  在临床上，加好抗生素的液体在冰箱只能存放4小时，所以你最好先分装双抗，如青霉素100u/ml 分装到EP管中(链霉素100ug/ml），－20℃冻存，用前临时加入培养基中。另外，注意无菌操作。祝成功！

• mickeylin (2012-6-08 15:24:17)

  
  谢谢你哦，我想问下我取材时有什么好点的方法可以减少污染的可能了？有人说用庆大霉素有人说用75％酒精？哪种比较好啊？

• mickeylin (2012-6-08 15:24:44)

  
  我养的是原代，取材很容易污染!

• hot_hot_hot (2012-6-08 15:25:11)

  
  我想请问一下同学，你原代培养的是什么细胞啊？

• viviwang1987 (2012-6-08 15:25:57)

  
  可以告诉你啊！绝对是污染，而且是相当厉害的污染！细菌污染是浑浊，真菌污染是变色！

• mickeylin (2012-6-08 15:26:44)

  QUOTE:

  原帖由 hot_hot_hot 于 2012-6-8 15:25 发表
  
  我想请问一下同学，你原代培养的是什么细胞啊？

  我养的是周细胞？怎么了？

• mickeylin (2012-6-08 15:27:00)

  在临床上，加好抗生素的液体在冰箱只能存放4小时，所以你最好先分装双抗，如青霉素100u/ml 分装到EP管中(链霉素100ug/ml），－20℃冻存，用前临时加入培养基中。另外，注意无菌操作。祝成功！
  
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  有人说低温保持容易降解，我现在很苦恼啊！

• mickeylin (2012-6-08 15:29:14)

  
  我是配培养基时加的，然后过滤培养基，这样是不是双抗效果不好？