[求助关于上流式检测细胞周期的问题]

最新回复

• ladyhuahua (2012-6-08 16:24:44)

  
  应该够了吧
  我用的是75%的乙醇,先4度预冷

• redbutterfly (2012-6-08 16:25:09)

  
  不但6孔板的细胞数量够用，就是12孔板也可以，只要消化完全离心彻底细胞数就够了。
  乙醇浓度在70-75%，温度不是4°c，而是-20°c。

• kulee (2012-6-08 16:25:29)

  
  4°c预冷。
  我们曾经试过不预冷也没有问题。

• owanaka (2012-6-08 16:26:35)

  
  １、细胞数够不够，要看细胞类型和接种密度，有些细胞如（ＨＬ－６０）６孔板，甚至１２孔板就够了，但有些细胞如（ＳＹ５Ｙ）６孔板就不够。
  ２、冰乙醇加入前是-20°c预冷的，固定也在-20°c。

• owanaka (2012-6-08 16:27:24)

  上机检测一般只要10000个细胞事件甚至更少，因此如果常规检测96孔板甚至也行，更不要说6孔板。当然用来调试仪器参数那就远远不够了，起码要6次方。
  75%乙醇最好预先置-20度预冷，说明书上都这么说的，操作也不麻烦，何必自寻烦恼呢？

• jujuba (2012-6-08 16:28:31)

  
  仪器要求是一回事，但技术员也就是操作者的能力也是不能忽视的。楼上说的10000个细胞左右我觉得差不多了，但前提是操作者的能力可以胜任，否则很可能你辛苦处理出来的标本被浪费。总之在做实验前要和人家沟通好，要是等你到了才开机调试，真可谓黄花菜都凉了。

• join (2012-6-08 16:30:43)

  恩！我养的是人皮成纤维细胞6孔应该够了！主要是流式那个老师给我说6孔的话有点悬！叫我一定要注意细胞数量！

• HPLC使者 (2012-6-08 16:32:19)

  这里提议周期检测只要10000的同学里做过10种以上细胞样本其中包括5种以上非血细胞样本的周期检测的请举手。
  这是要说明，50000个events的要求是有道理的。事实上，很多（不是少数）细胞本身容易粘连团聚，单细胞悬液的制备不是对所有的细胞样本来说都是易如反掌的。这跟流式操作员的技术水平无关，你的样本有效单细胞少，拟合软件的计算当然不可能尽量精确了。还有部分样本的细胞DNA含量异质性较高，荧光强度的离散度较大，按照统计学要求也就是拟合软件的计算要求，样本数就要大没得说，10000个出来边缘犬牙交错的histogram，那样拟合出来的结果可靠吗？操作员能做的是做好光路校正，这个不是难度的问题而是态度的问题。
  6孔够了，但是人家提醒的注意细胞数量也是有道理的，不只是看培养状态下的细胞密度，还要注意制备过程。够不够固定完上机前到光镜下看一看就心里有数了。

• 园丁## (2012-6-08 16:32:51)

  可能我表述的不够清楚，让你误解了。我做的都是细胞株，细胞单一整齐，不是组织样本，因此上机效率较高。

• 8964357 (2012-6-08 16:33:24)

  你表述没问题，我也没有误解，我猜就是这情况，有同学才会以点代面来说明问题，所以才说那第一句话。