[求助]原代细胞培养技术

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• 831226 (2012-6-09 12:52:45)

  
  原代细胞培养的主要注意内容是注意无菌操作的问题，这个问题解决了，细胞培养也就成功了一半。我先砸砖，说一下需要注意的事项。
  
  1.注意喷酒精装置的应用：制作很简单，用过的化妆品，理发店理发前往头发上喷 水的瓶子及其他一些有喷水功能的瓶子，经过处理装上百分之75的酒精就可以了（我不知道有没有实验专用喷洒酒精的瓶子，如果有那就更好了）。我用的是师姐留下来的一种护肤品的瓶子。常常往超净台台面，手上喷洒酒精，效果很好。
  
  2。我进入细胞培养室就戴上PE手套（一次性塑料薄膜手套），当在超净台操作时戴上一次性橡胶手套。要注意手的无菌。
  
  3。培养箱内水盘里的水，用灭菌的超净水，每周更换一次（至少也要两周换一次）。换水前要用百分之75酒精消毒。水浴箱也要定期消毒（用百分之75酒精）换双蒸水。
  
  4。从培养箱内取东西前手一定要喷酒精，动作要快，可以先看好了，要取的东西在那里，然后快取。显微镜下观看细胞时间也不要过久，否则会对细胞有不利影响。
  
  5。很多人喜欢常规用抗生素，其实除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到毒性水平。
  
  6。液体培养基贮存于4℃ 冰箱，实验进行前放在37℃ 水槽中温热。温热前后注意酒精消毒。
  
  7。用离心法从动物身上取细胞时， 其离心速率不要超过1000转/分钟（很多文献上都大于这个数值，但记住不要超过1000），时间一般不超过10分钟，否则会造成细胞死亡。

• vvmmoy (2012-6-09 12:53:08)

  5。很多人喜欢常规用抗生素，其实除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到毒性水平。
  
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  真得有这个问题吗？有没有实际例子说明一下？

• lixi559 (2012-6-09 12:54:01)

  推荐：《体外培养的原理与技术》主编：薛庆善 科学出版社出版
  自己看书会很系统而且全面，当然与人交流也必不可少

• fqswdzd (2012-6-09 12:54:25)

  
  有谁培养小鼠肺微血管内皮细胞的啊?

• is2011 (2012-6-09 12:54:45)

  其实关键在于无菌操作：）消毒常规就可以的，你可以看看临床常规的消毒技术，最好不要在培养液里加抗生素，的确对细胞的毒性较大，如果你培养到三代以上就会知道的

• cj_mondy (2012-6-09 12:55:12)

  其实关键在于无菌操作：）消毒常规就可以的，你可以看看临床常规的消毒技术，最好不要在培养液里加抗生素，的确对细胞的毒性较大，如果你培养到三代以上就会知道的
  
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  我养原代，用的是无血清培养基，一直加抗生素的，真的影响更大吗？

• lixi559 (2012-6-09 12:55:55)

  
  原代细胞是不是活性都不好?

• lixi559 (2012-6-09 12:56:45)

  
  长没几天,细胞就开始崩解,这是什么原因?请教

• hot_hot_hot (2012-6-09 12:57:04)

  
  原代培养还是建议加单倍双抗，毕竟组织块培养法使用者多，用双抗细胞成活的可能性大！

• lixi559 (2012-6-09 12:58:11)

  
  能具体说一下吗？怎么个单倍双抗？