[求助]请教谁养过HepG2 ?

最新回复

• 49888 (2012-6-15 10:22:42)

  
  培养条件：10%FBS+DMEM

• 49888 (2012-6-15 10:23:02)

  
  还有我每次传代消化时，非常难消化（达10多分钟），也比较难吹打散开，请帮忙指点一下！

• bananapeople (2012-6-15 10:24:42)

  
  本人正在养HepG2.2.15细胞，是导入外源基因的HepG2细胞，感觉很好养，估计你的那个细胞应该和我的差不多，你的细胞形态和我的差不多，只是你的细胞没有吹打开，所以有很多成团的细胞，这样细胞会越养越差，建议你延长消化时间（推荐时间20分钟），或胰酶中加入EDTA（前提是不会影响你的指标检测）。

• dog002 (2012-6-15 10:25:05)

  
  我在养hepg2细胞，感觉细胞形态不太对，应该大多数是短梭形，但你的细胞圆形的太多，另外，我是用0.25％胰酶＋0.02％EDTA消化细胞的，消化2分钟就OK了，所以不知道你的细胞是不是已经变异了

• TAT (2012-6-15 10:25:22)

  
  我觉得是关键是细胞没有吹散，以致于细胞整体状态不太好。以前我养的这种细胞长得还可以，也能吹成单个细胞，而且也不是要那么长的消化时间。

• 101010 (2012-6-15 10:26:28)

  附图片一张

  
  23022980.snap.jpg

• glass (2012-6-15 10:28:33)

  
  我也在养HepG2，细胞形态与楼主的一致，消化是用0.25%胰酶+EDTA，很好消化的。

• duoduo (2012-6-15 10:29:01)

  我也在养HepG2，细胞形态与duanyanfang的一致，消化是用0.25%胰酶+EDTA，很好消化的。
  
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  我的也是，但消化时间更短，一般也就30秒至1分钟。
  
  是不是LZ的胰酶有问题呀？

• c86v (2012-6-15 10:29:25)

  
  你在用胰酶消化前，用PBS清洗细胞一遍没有的呢？如果没有清洗的话，medium里的FBS会抑制酶的活力，所以所需消化的时间比较长，我试了一下，约为5－6min；而如果先用PBS清洗过的，那么就快一些，约需3min即可。另外，我选择胰酶的浓度为0.5％。

• 2541 (2012-6-15 10:31:55)

  
  消化前用PBS多洗几遍，消化时间会短一些．还有就是如果瓶子是新的一次性的，消化时间可能会要求长点

• one (2012-6-15 10:32:38)

  消化前先用PBS或D－Hanks液冲洗一下，这样可以减少残留DMEM对胰酶的影响，另外在37℃消化的效果要好一点，再就是看看胰酶有没有问题
  祝好

• woshituzhu (2012-6-15 10:33:02)

  
  我看楼上的回答都很好。
  1 你把胰酶一次配制200ml以上，但分装成每瓶50ml，这就够你一年用了。冻存在-20度。
  2 每次取出一瓶放4度冰箱，使用时取出，加好后就收起来放回。胰酶在超净台上放置时间越短越好，否则消化能力下降很快。
  3 估计你的胰酶活性下降了，消化一般需要2-3分钟，不超过5分钟。
  4 加入胰酶前用D-Hanks洗一下是个好办法。
  5 你的细胞消化不好，可能不是吹打不足的问题。
  6 我观察到，有些细胞不加EDTA消化就很好，但HepG2不行，不加就不能完全吹打开，建议你加上。

• am10 (2012-6-15 10:33:25)

  TO 楼主 :这个细胞周边的小黑点是什么东西,这正常吗?我的细胞也总会出现这样的情况

• pencil菲 (2012-6-15 10:33:57)

  
  用PBS洗上三遍以上，细胞会容易消化，建议试一下！
  你的细胞没吹打开！！

• loli (2012-6-15 10:34:35)

  换了新的胰酶，消化好多了，一般2-3min.
  但是细胞吹打还是不太好，不知怎么解决为好？
  附上我最近培养的图片40×

  
  44385036.snap.jpg

• hot_hot_hot (2012-6-15 10:37:17)

  消化时可以到显微镜下观察,能看到细胞变圆了,再把胰酶倒掉
  就好吹一点,吹的时候不要太猛了

• toy (2012-6-15 10:37:41)

  
  请问你的细胞图片是用普通相机在倒置显微镜下照的吗？我养心肌细胞也是这样照的，为什么没这么清楚啊？

• guagua (2012-6-15 10:38:12)

  你的细胞周围培养瓶上有些黑点是什么东西？我现在也养这个细胞，我的细胞也有这种小黑点，而且感觉细胞里也有。其他人的细胞呢？开始怀疑是培养瓶的问题，但是培养瓶养其他细胞又没有。是不是这种细胞都有呢？
  
  另外，如果用胰酶不好消化一方面可以用EDTA-胰酶，另一方面，你消化到最后可以少留点胰酶（大约0.2ml），你先用胰酶吹打一下细胞，最后再加入培养基，这样分的就比较开了。

• eric930 (2012-6-15 10:38:36)

  你那个HepG2.2.15细胞导入了什么基因呢？是不是弥补了HepG2本身有些酶活性不高的缺陷？好像浙江大学余应年教授就在这个细胞株上导了个基因吧。你是用的那个细胞株吗？

• 831226 (2012-6-15 10:39:04)

  换了新的胰酶，消化好多了，一般2-3min.
  但是细胞吹打还是不太好，不知怎么解决为好？
  附上我最近培养的图片40×
  
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  我觉得吹打不是关键，关键是消化，火候要合适，消化时间要看胰酶的活性，开始时候应显微镜下观察加入胰酶后细胞形态的变化，我一般都是这样做的：
  
  1。细胞稍有收缩变形的趋势，将培养瓶倒置（避免胰酶长时间作用，损伤细胞）；
  
  2。吸尽胰酶（一定要尽量吸尽）；
  
  3。尽快加入含FBS的培养基（中和胰酶，以加入培养基后，细胞顺着瓶壁流沙一样滑落为宜，培养基没有经过的地方细胞还挂在壁上！）；
  
  4。这时候稍加吹吸，使细胞离壁、分散即可（避免太过用力对细胞造成机械损伤）。。。
  
  祝你的细胞们茁壮成长！*^_^*