[讨论帖]培养hella细胞

最新回复

• HP007 (2012-6-16 11:46:01)

  
  1. 检查一下胰酶的活力；
  2. 在尽弃上清之后，可以用无菌的PBS清洗细胞1-2次，以免有残留的血清影响胰酶的工作；
  3. 可以适当的延长消化时间，如果初次培养掌握不好时间，可以借助显微镜观察；
  4. Hela细胞是相对容易培养的，所以不用担心，应该没有什么问题。

• gogo (2012-6-16 11:47:14)

  
  消化的时候放在37度温箱里效果会很快的。

• tianmei001 (2012-6-16 11:47:35)

  
  我的Ｈela细胞不知道为什么出现了许多圆形的细胞,有的贴壁,有的不贴壁,有没有人知道是什么原因啊!~!!!!

• milkdog (2012-6-16 11:49:03)

  1. 检查一下胰酶的活力；
  2. 在尽弃上清之后，可以用无菌的PBS清洗细胞1-2次，以免有残留的血清影响胰酶的工作；
  3. 可以适当的延长消化时间，如果初次培养掌握不好时间，可以借助显微镜观察；
  4. Hela细胞是相对容易培养的，所以不用担心，应该没有什么问题。
  
  ————————————————————————————————
  
  同意，HeLa细胞我养过，觉得还算比较好消化吧！
  如果把握不准时间，加入胰酶后镜下观察形态改变就是了！

• woshituzhu (2012-6-16 11:50:40)

  
  胰酶没问题、操作没问题的话，难消化说明细胞活力好，贴壁紧哇，^_^
  消化的时候可以用手掌贴在培养瓶底部，用体温加热，而且可以同步观察细胞的消化情况
  转移到培养箱太麻烦了，而且要把细胞拿出超净台，增加染菌的机会

• nn255 (2012-6-16 11:51:38)

  我也培养过HeLa细胞，在培养瓶内培养时，未曾遇到过难消化的问题，但在24孔聚苯乙烯培养板上遇到过。培养时间一长，细胞贴壁很牢固，就出现难消化的问题，可以适当的延长消化时间；如果你的培养瓶是一次性的，这种材料很利于细胞贴壁生长，故难消化；还有胰酶配制问题，是不是严格按照胰酶的配方来配的，胰酶粉加得过多或过少，都会影响消化时间，再就是消化温度，一般胰酶在37度消化效果最好，消化时可将培养瓶喷过酒精之后放回培养箱内消化，提高胰酶活力，利于消化，但消化时间不可过长，消化后一定要加培养基终止消化，否则影响细胞生长；培养瓶内的培养基尽量倒干净，以免残留培养基影响消化。
  以上是偶在培养HeLa细胞中的一点体会，仅供参考，祝你好运！

• nn255 (2012-6-16 11:52:09)

  
  偶在培养过程中也遇到过细胞变圆漂浮的问题，主要原因可能有：
  1. 培养基养分是否足够，如果培养瓶内细胞数量够多，由于细胞争夺营养，生长状态不好的细胞自然就脱落死亡，若培养基变黄了就该更换培养基了；
  2. 血清浓度问题，培养基中血清的浓度是否是10%。血清浓度偏低的话，细胞容易凋亡；
  3. PH值问题，HeLa细胞适宜在稍偏酸的环境中生长，若培养基偏碱，不利于细胞生长；
  4.培养基有没有变黄变混浊，若是这样，有可能是支原体感染；
  解决方法：若是支原体感染建议扔掉，重新复苏；若是培养基问题，重新配过，注意血清浓度及PH值问题，培养基在过滤之后PH值会有所上升，建议过滤前将PH调至7左右；细胞换液时可用灭菌的PBS反复冲洗几次，将漂浮及贴壁不紧生长状态不好的细胞洗掉，观察一下漂浮细胞数量会不会减少。
  好运！

• u234 (2012-6-16 11:52:31)

  在你的胰酶中加EDTA。消化作用快，且对细胞损害小。我想不是你的细胞出了问题，而是你的酶。

• ALALA (2012-6-16 11:53:05)

  
  我的培养基变黄了 但是不浑浊，有问题吗？

• dog002 (2012-6-16 11:53:23)

  
  我的培养基变黄了 但是不浑浊，有问题吗？
  －－－－－－－－－－－－－－－－
  没有问题，那是PH值改变了。在培养基里是使用酚红作为指示剂的，在7.4左右是粉红色或者偏红色。在6.8及以下时，是黄色。
  所以，你的培养基应该及时更换。

• ALALA (2012-6-16 11:53:43)

  
  谢谢大家的回答，我在胰酶中加了EDTA细胞很快就消化下来了，再问一个问题，如果Hella细胞培养了四，五代之后，在下一次的传代的过程中忘记用PBS洗了，对细胞有什么影响吗？

• 66+77 (2012-6-16 11:54:41)

  
  我正在养hela细胞。hela细胞很好消化。我曾经做过一对比，用相同的胰酶，hela细胞只需1分钟即可消化好，而肝癌细胞最少需要5分钟。我用的是科诺的胰酶，害怕对细胞伤害大，我已将胰酶稀释了好几倍，所以问题肯定出在你的胰酶上。

• xyw5 (2012-6-16 11:55:14)

  
  我的hela细胞生长旺盛但是胞浆内颗粒很多，不透亮，没有污染，请问哪位大虾知道怎么处理能让细胞内颗粒少一点，透亮一点不

• kewanqi2011 (2012-6-16 11:55:41)

  我的培养基变黄了 但是不浑浊，有问题吗？
  －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
  我的培养基变黄了 但是不浑浊，有问题吗？
  －－－－－－－－－－－－－－－－
  没有问题，那是PH值改变了。在培养基里是使用酚红作为指示剂的，在7.4左右是粉红色或者偏红色。在6.8及以下时，是黄色。
  所以，你的培养基应该及时更换。
  －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
  
  不能笼统的说换培养液就可以了，要看培养基黄的程度，如果是纯黄色（一点都不带红），并且是换液的第二天就黄，那就是微生物污染了，并且还是一种不会使培养基变浑浊的微生物，细胞不能保留；如果是细胞长得很密，多天没换液，培养基变黄，那就是培养基营养被消耗，PH值发生改变了，要传代了。