[求助]细胞传代是否一定要等24小时呢？

最新回复

• duoduo (2012-6-16 12:46:52)

  
  很多试验中要求分盘后24h时再开始实验（如转染），除了让细胞充分贴壁，还有一个重要原因就是使细胞达到正常代谢水平。
  从你的描述来看，如果细胞贴壁还比较快的话，个人认为可以进行传代，若细胞密度过高达接触抑制，细胞比较容易老化。还有建议最好传代时采用更低一些的稀释度（1:3或者更低）

• nn255 (2012-6-16 12:47:18)

  
  感觉1:2太高了，不知道你养的是什么细胞，建议到ATCC上查找一下,会找到最佳的subcultivation ratio.以便保证细胞的最佳状态，不要舍不得扔细胞，subculture的时候把细胞全用上，你的细胞长得快，频繁的subculture，细胞不但不能优化还可能会发生变异。

• tudou85 (2012-6-16 12:47:45)

  我养的是RAW264.7细胞，不知道为什么长得这么快？而且消化也很容易，好像和园子里其他养RAW细胞的很不一样
  楼上说1：2太高了是什么意思啊？是不是要1：3以上传代呢？因为如果传得太稀了，细胞长起来比较慢，可能有群集效应。所以一般每天传代
  到底传代频繁是能够改善细胞状态还是像楼上所说得会造成变异呢？
  不懂

• 8princess8 (2012-6-16 12:48:19)

  我养的是RAW264.7细胞，不知道为什么长得这么快？而且消化也很容易，好像和园子里其他养RAW细胞的很不一样
  未必是细胞长得快，只是你原本的接种密度就很高，消化很容易可能因为你的细胞贴壁性不好。
  楼上说1：2太高了是什么意思啊？是不是要1：3以上传代呢？因为如果传得太稀了，细胞长起来比较慢，可能有群集效应。所以一般每天传代
  你现在的情况是长的太快了，所以可以适当降低一下传代密度，可以试试1:3或者更高的稀释度。关于群集效应，你指的是细胞分布不均吗？只要在分盘以后好好摇匀就可以了。
  到底传代频繁是能够改善细胞状态还是像楼上所说得会造成变异呢？
  
  不懂

• wsll (2012-6-16 12:48:40)

  
  我养的是骨肉瘤细胞，生长速度也很快。我一般等长满了就传代，不是特别关注时间。你在传代分瓶的时候多分几瓶。但也不能太多，因为细胞太少的时候会抑制它们的生长速度

• tudou85 (2012-6-16 12:49:09)

  对，以前没有考虑过，现在觉得，其实1：3传代可能更适合现在的细胞生长速度，长得太快太慢了，细胞都挤的变圆了

• is2011 (2012-6-16 12:49:58)

  
  细胞太少的时候会抑制它们的生长速度
  --------------------------------------------------------
  请教一下，为什么会这样呢？

• guagua (2012-6-16 12:51:08)

  建议加大传代比率，1：3或1：4传。反复传代劳命伤财，对细胞也有害，特别是细胞未到24h。
  细胞传代的比率要适当。
  细胞太少，生长慢，因细胞生长需相互间有信号传导。
  细胞太多，也不好，因细胞太多会有“接触抑制”。

• tudou85 (2012-6-16 12:52:37)

  谢楼上的兄弟姐妹们，看样子以细胞现在的生长速度，1：3是个不错的比例哦，非常感谢

• mimili_901 (2012-6-16 12:52:58)

  
  刚帮你查下：
  RAW 264.7
  
  Subcultivation ratio: A subcultivation ratio of 1:3 to 1:6 is recommended
  
  Medium renewal: Replace or add medium every 2 to 3 days.
  所以说你1：2传太高了，是这个意思。

• tudou85 (2012-6-16 12:54:16)

  
  谢谢，我也从ATCC上看过这个，不过由于我们养的细胞不可能和他们的条件完全一样，所以对于传代就不可能完全按照它们说的。不过看来还是有一定的道理哦

• Ao7 (2012-6-16 12:54:39)

  细胞太少的时候会抑制它们的生长速度
  --------------------------------------------------------
  请教一下，为什么会这样呢？
  
  ————————————————————————————————————————————————————————
  
  细胞生长需要一定的辅因子，而这些不仅要求血清供给，还有细胞在培养过程中生成的，若细胞太少，会导致这类因子不足
  
  有时候会在培养细胞时候，放一些伴生长细胞是这个原因，好像叫保姆细胞

• shenkunjie (2012-6-16 12:55:12)

  最近细胞状态不错，一般传代（1传2）后大概16－20个小时左右就能够长到90％，请问是应该一定等到24小时再传代，还是可以等长到90％（<24小时）就可以传了呢？
  如果没到24小时就传代的话，会对细胞状态有影响么？
  
  ————————————————————————————————
  
  看是什么细胞了
  如是生长比较旺盛的细胞，只要贴壁情况良好就可以传
  我培养的是hela细胞
  复苏后不到24小时的换液以后，过了-6小时就可以传代了
  
  但是好像对其他多数细胞建议还是24小时后传

• moonlight45 (2012-6-16 12:55:31)

  
  RAW264.7好像就是长得挺快的，不过贴壁应该是很牢的

• tudou85 (2012-6-16 12:55:48)

  
  是啊，所以怪事，难道我们的不是RAW？一直不懂，是不是传代次数太多了就变了呢？