[求助]原代成骨细胞的生长

最新回复

• 8964357 (2012-6-16 16:40:26)

  
  我做的是成骨细胞，我觉得正常。它长满了就好了。原代培养的密度我觉得是比较低的，并不是所有消化的细胞都能贴壁。如有什么疑问可以再讨论。
  我是做药效的。

• 小野花 (2012-6-16 16:40:46)

  
  很正常，再过2-3天就可以长很多了，5-6天就汇合的很好了

• 小野花 (2012-6-16 16:41:09)

  请问 楼上 成骨细胞原代培养多久能贴壁？我用胰酶消化20分钟，胶原酶2小时，为什么细胞一天都不贴壁？有时候要两天才贴？用玻璃培养瓶可以吗 ？急啊

• 小野花 (2012-6-16 16:41:32)

  ???
  我做的成骨细胞一天就可以贴壁。我用过1640，DMEM培养基培养过。都能存活。但我个人感觉1640的贴壁效果要好，贴壁数多。你的要两天才能贴壁？是否一次培养液加的太多，我一般一次只做一瓶，也就5-6ml。我是用玻璃瓶做的，我也用一次性塑料瓶做过，但感觉玻璃的比塑料的长的形态要好。我现在一直用DMEM养，24h后贴壁的数目不多，但长上一周就会融合了。祝你顺利。

• 二丫头466 (2012-6-16 16:41:50)

  
  多谢各位
  我用的培养基是10％FBS的DMEM
  总体观察发现好像成纤维的数量多于成骨的数量，怎么办呢

• 二丫头466 (2012-6-16 16:42:06)

  培养24h后，悬液中仿佛还有些细胞未贴壁，那还是成骨吗？换液时就将其倒掉了，有影响吗？

• 小野花 (2012-6-16 16:42:25)

  
  及时的换液，纤维细胞在你以后的传代过程中会逐渐减少，传代要即使倒掉胰酶

• 二丫头466 (2012-6-16 16:47:48)

  
  成骨细胞原代培养4d的长势，请教各位帮忙分析下，多谢

  
  73256897.snap.jpg

• 小野花 (2012-6-16 16:49:21)

  今天我的细胞已经分离接近3天了,只有少部分贴壁,换液后就更少了,我自己找不出原因了,向大家请教.
  第一天看到的细胞很多,就不贴壁,而且今天换液后,感觉成纤维细胞较多,是什么原因呢?
  你们分离成纤维细胞用什么方法呢?我用差速沉降法.
  原代传出的细胞算是第几代呢?

• greenbee (2012-6-16 16:49:43)

  
  上面的照片，我觉得长势比较良好！！恭喜啊！
  to xiaohui-gbm：你观察细胞贴壁后的第二天细胞增殖了没？一般贴壁后的第二天会有增殖的。原代细胞一部分不贴壁是正常的，不是所有的细胞都能贴壁。原代细胞贴壁长满培养瓶后第一次传代完成后，称为第一代。
  我们实验室现在正在做成骨细胞、肾细胞、心肌细胞的原代培养，有兴趣的同学可以一起交流。我的qq：544251458。祝大家工作顺利！

• hyuu (2012-6-16 16:50:26)

  请教各位，细胞的这种状态可以算长满瓶底吗？可以进行传代吗？

  
  26832463.snap.jpg

• 小野花 (2012-6-16 16:50:56)

  
  感觉你的细胞里混有成纤维细胞,建议差速沉降法传代

• 二丫头466 (2012-6-16 16:51:17)

  
  差速沉降法？没用过，能否进一步指导一下
  多谢

• DDD (2012-6-16 16:52:03)

  我感觉你的细胞没什么问题
  挺好的！
  可以传代，但不是很满

• 小野花 (2012-6-16 16:52:25)

  就是,当你离心吹打后,置于培养瓶中10分左右,再将其倒入另一个培养瓶中.
  因为成纤维细胞会在10分左右先于成骨细胞贴壁,所以可以除去部分成纤维细胞.我的成骨细胞较纯的时候是趋于椭圆的,纤维状梭型细胞不多.以上个人看法,仅供参考

• 二丫头466 (2012-6-16 16:52:41)

  
  能用传五六代的成骨细胞用于实验吗？由于客观原因，没赶上用第三代细胞实验

• vivian4123 (2012-6-16 16:53:03)

  成纤维细胞和成骨细胞从形态上来没有很大的差别，至少我是这样感觉的，要确定你细胞的纯度，可以通过染色，用osteocalcin（或者alkaline phosphatase)去标记细胞。
  当然用差速沉降法传代可以提高纯度，但是你的实验中如果需要高纯度的成骨细胞，也可以用流式去分离。

• 小野花 (2012-6-16 16:53:20)

  
  我觉得差别很大呢,成纤维细胞较长,而且有一个方向张的趋势,可成骨细胞就是圆的略方,成铺路石状.以上是我个人看法,期待与大家的交流,如有错误,竟请指正

• vera+ (2012-6-16 16:54:09)

  
  形态学上至少我认为差别不大，当你染色的时候你会发现，有些细胞看起来像成骨细胞，但是用骨钙素染色的时候却是成纤维细胞，有些感觉是成纤维细胞，但是染色却是阳性。

• 04906 (2012-6-16 16:54:26)

  我个人的经验，原代的成骨细胞不贴壁和消化后的离心有关，一般我离心洗涤两次，这样可以把消化酶去除干净，我觉得残留的消化酶对细胞贴壁是有影响的，我养的是小鼠颅骨成骨细胞，感觉一天就能贴壁很满了，呵呵，而且没有那么多很梭形的细胞~~