【分享】冻兔肉中六六六、滴滴涕残留量检验方法

　　本标准适用于测定冻兔肉六六六、滴滴涕的残留量。

　　1. 取样

　　1.1 数量：每检验批最多不超过25000箱，按以下比例，抽取有代表性的样品。

　　5000箱以下最少开15箱;

　　10000箱以下最少开20箱;

　　15000箱以下最少开25箱;

　　20000箱以下最少开30箱;

　　25000箱以下最少开35箱;

　　每箱取样重量不少于500克。

　　1.2 样品制备：带骨兔沿椎柱剖割两半取半只去骨，将所有可食部分放入绞肉机中，至少绞碎三次，充分混匀，然后用四分法缩分出1公斤;不带骨的兔肉，可直接绞碎缩分，装入清洁的容器内，作为实验室样品。实验室样品必须立即封识，并填写标签，注明品名、日期、垛位、报验号、申请单位、取样人。

　　注：在取出第一个样品及所有以后的操作中，必须注意不使样品中带进任何污染物，或者有任何变化而使实验室样品不能代表这一批的总样。

　　2 检验方法

　　2.1 仪器

　　2.1.1 气相色谱仪并配备如下装置：

　　2.1.1.1 电子捕获检测器;

　　2.1.1.2 玻璃色谱柱：2.0米×2.5毫米(内径);

　　2.1.1.3 色谱柱填料：2.5%OV-17+3.3% QF-1混合液Chromosorb W-AW-DMCS 80～100目。

　　2.1.1.4 操作条件：

　　a.载气流速：氮气，40毫升/分;

　　b.柱温：192℃;

　　c.进样口温度：230℃;

　　d.检测器温度：210℃。

　　2.1.2 微量注射器：1微升，10微升。

　　2.1.3 绞肉机。

　　2.1.4 全玻璃系统重蒸馏装置。

　　2.1.5 旋转蒸发器：SZ-3型。

　　2.1.6 无水硫酸钠柱：在斗径20毫米，筒身高70毫米，柄外径8毫米的筒形漏斗内，下部放玻璃棉，上部放约15克无水硫酸钠。

　　2.2 试剂

　　2.2.1 蒸馏水：取蒸馏水100毫升用石油醚10毫升提取，在准备应用的色谱条件下，调节仪器，取5微升提取液注入气相色谱仪内，该石油醚在色谱图上，应无石油醚以外的杂峰。

　　2.2.2 石油醚：分析纯，沸程60～75℃，取300毫升在旋转蒸发器中浓缩至5毫升，在准备应用的条件下，调节仪器，取浓缩液5微升注入气相色谱仪内，在色谱上除本溶剂峰外，其他峰高不得超过相当于2×10-11克的丙体-六六六的峰高。

　　2.2.3 无水硫酸钠：分析纯，650℃灼烧4小时。

　　2.2.4 2%硫酸钠水溶液。

　　2.2.5 浓硫酸：分析纯。

　　2.2.6 冰乙酸：分析纯。

　　2.2.7 高氯酸：分析纯。

　　2.2.8 内标溶液(环氧七氯)和标准农药溶液：

　　2.2.8.1 内标物及标准农药的含量大于99%。

　　2.2.8.2 称取环氧七氯、甲体-六六六、乙体-六六六、丙体-六六六、丁体-六六六、PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT标准品各 0.0100克，先用少许苯溶解后，再分别用石油醚转移，定容于100毫升容量瓶中。(其溶液浓度为100微克/毫升)分别为A溶液。

　　注：如果试样中存在环氧七氯，可选择其他内标物。

　　2.2.8.3 分别用移液管从A溶液中取甲体-六六六、丙体-六六六各1毫升;丁体-六六六2毫升;乙体-六六六、PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、 PP′-DDT各5毫升。各置于200毫升容量瓶中，用石油醚定容(其溶液浓度分别为甲体-六六六、丙体-六六六0.5微克/毫升。丁体-六六六1.0微克/毫升。乙体-六六六、PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT2.5微克/毫升)。分别为B溶液。

　　2.2.8.4 配制11种不同浓度应用标准液：分别取8种B溶液各16，14，12，10，8，6，4，2，1.6，0.8，0.2毫升，置于11个100毫升容量瓶内，分别各加入100微升环氧七氯后，用石油醚定容到100毫升〔其溶液浓度见下表(纳克/微升)〕。分别为C溶液。

　　应用标准C溶液

01.png

　　2.3 操作步骤

　　2.3.1 提取

　　取绞碎混匀的实验室样品25～50克，放入250毫升锥形瓶内，加入1∶1高氯酸-冰乙酸100毫升，瓶口上放一小漏斗，置于80℃水浴上，并时时振摇 (为防止产生炭粒，开始放水浴上时，要不断振摇几分钟)，至内容物全部消化为止。以100毫升蒸馏水冲洗，并入分液漏斗中，分别用100、50、50毫升石油醚抽提三次。合并石油醚提取液，通过无水硫酸钠柱过滤，收集于另一干净的分液漏斗中，并用15毫升石油醚分三次洗涤无水硫酸钠柱。

　　2.3.2 净化

　　于提取液中加入浓硫酸(提取液和浓硫酸的比例为10∶1)，轻轻振摇后，静置分层，放去下层。重复净化1～2次，每次振摇半分钟，静置分层后放去下层溶液。将石油醚液转入另一干净的分液漏斗中，每次用100毫升硫酸钠水溶液洗涤2～3次，弃去水层。过无水硫酸钠柱，并用少量石油醚洗涤分液漏斗及无水硫酸钠柱，收集于带塞玻璃瓶中(如农药含量过低可浓缩至适当体积)，定量加入内标环氧七氯溶液，摇匀后进行气相色谱测定。

　　2.3.3 空白试验：按上述条件进行空白试验。

　　2.3.4 测定

　　2.3.4.1 取C溶液各5微升进行色谱测定(出峰顺序：甲体-六六六，丙体-六六六，乙体-六六六，丁体-六六六，环氧七氯，PP′-DDE，OP′-DDT，PP′-DDD，PP′-DDT)并量取其峰高值。

　　2.3.4.2 取适量的上述净化液0.2～10微升之间(使其响应值在检测器线性范围内)，进行色谱测定。选择与样品峰高相近的标准农药峰高，按下式分别计算每种农药的残留量：

02.png

　　式中：H和H′——样品峰高和标准峰高(毫米);

　　H0——样品中内标峰高(毫米);

　　——标准品中内标峰高(毫米)

　　C0和——注入色谱仪内标准溶液中农药和内示物浓度(纳克/微升);

　　W——样品重量(克);

　　W0——样品中内标物重量(微克)。