[求助]关于MTT法加DMSO前处理上清的问题

最新回复

• junjie05 (2012-6-20 12:24:19)

  
  细胞数过大的话可能会引起细胞营养不足而死亡，破裂后放出一些细胞内容物，可能是干扰你测定的原因
  
  另外MTT处理4小时还是用枪吸去上清比较好，小心一点就可以了

• kewanqi2011 (2012-6-20 12:24:41)

  
  我加入ＭＴＴ４小时以后，将９６孔板放到离心机中稍离心，然后一次性倒扣９６孔板除去上清，实验的结果不错，可以试试看

• bongte (2012-6-20 12:25:09)

  我也倒扣了一次，但发现颗粒倒出了许多！

• yhz1973 (2012-6-20 12:25:40)

  
  我不知道小鼠脾淋巴细胞增殖速度如何，但一般做增殖的话确实细胞数不宜过多。
  看你说的5×10E5cells/well，确实很多了，我一般在1～5×10E5cells/ml,也就是1～5×10E4cells/well。不知道你是不是单位搞错了…

• zwsyrt (2012-6-20 12:26:00)

  我是用加样枪吸去上清,

• moonlight45 (2012-6-20 12:26:47)

  
  我觉得你的细胞浓度有点小吧？我做时，原始细胞浓度一般是2000000/ml,96孔板每孔200ml，4小时后先离心（200 g，5 min），然后轻轻的倒扣在几层纸巾上，翻转过来后用纸巾轻轻吸一下孔壁上的液体（注意不要碰到底部），加20ulMTT,避光震荡10分钟上机检测。检测时波长是490nm，震荡5s模式。
  还有就是你在镜下观察有增殖吗？细胞浓度对增增殖很重要的。

• yueban-1147 (2012-6-20 12:28:46)

  
  那要看你做的细胞能不能 复层生长了，增殖实验接种数应不宜过多，以我们自己的经验200000个/well就可以了。

• yueban-1147 (2012-6-20 12:29:57)

  
  我之前做MTT也是甩出去，然后在铺有抽纸的桌面上轻拍，发现有些紫色物质会被拍到纸上，这样肯定是会影响结果的。如果用枪吸不干也会影响结果的，我个人认为将96孔板稍离心，然后再倒掉上清这个办法比较好。

• idea2011 (2012-6-20 12:30:49)

  都是什么菜鸟啊！
  
  能甩吗？！
  
  用200ul的枪尖轻轻地小心吸除，
  增殖试验要看细胞大小，小的2500个/well，大的1500个/well，你可以做一个浓度梯度试一块板，24hOD值在0.2-0.5之间

• idea2011 (2012-6-20 12:31:42)

  
  0.2-0.8的线性化最好，超过1.1一般就别作图了

• 小鱼鱼 (2012-6-20 12:32:36)

  
  请教各位, 96孔板用什么离心啊?