[求助]细胞污染

最新回复

• u234 (2012-6-20 12:35:57)

  
  可能是细胞株有问题，再找好的；
  请有经验的老师给你养一养，你再接着养。

• loli (2012-6-20 12:36:14)

  不知道你加了双抗（青链霉素）没有，如果加了，情况会好一些。另外就是细胞台的消毒和操作过程中的规范，既然已经有污染，不如舍弃，以免造成更大的损失。

• 33号 (2012-6-20 12:36:48)

  怕以前的双抗失效，还是新配的双抗。现在也在怀疑细胞株的问题，但几株细胞同时出现这一情况又似乎不是这个原因…

• am10 (2012-6-20 12:37:29)

  我的细胞也是出现这种问题，而培养基并未浑浊，细胞生长缓慢，但是培养基很快变黄（换液第二天）。不知道是怎么回事？

• guagua (2012-6-20 12:37:52)

  污染物为黑色小颗粒，200倍下就能看到，细看下小黑点在抖动。
  似乎与细胞生长有竞争关系，在一株长得比较慢的细胞里，颗粒较多；而在一株生长较旺盛的细胞里，则颗粒较少。
  单独将未加血清的培养基、加血清的培养基置于37°孵育均未见黑色颗粒。
  培养室彻底灭菌后（甲醛熏蒸24hr，培养箱用紫外灭菌），重配培养基，复苏细胞后还是发现黑色颗粒…
  
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  我个人很大程度上倾向于这不是污染。
  
  200倍是高倍，这种高倍镜下可以看到布朗运动，所以会有小黑点在动，这种运动和细菌的区别在于细菌是向一个方向大幅度游动，而布朗运动是原地抖动。
  
  与细胞有竞争关系的原因是，细胞少，那么死细胞就多，碎片就多，会动的就多，你误以为是竞争关系。
  
  单独将未加血清的培养基、加血清的培养基置于37°孵育均未见黑色颗粒是因为里面没有细胞碎片。
  
  “培养室彻底灭菌后（甲醛熏蒸24hr，培养箱用紫外灭菌），重配培养基，复苏细胞后还是发现黑色颗粒…”，污染与培养室和培养箱几乎是没关系的，在我们实验室，培养室和培养箱无论是什么样子，我的细胞都不污染（两年），污染的老是那么固定的几个人，重在操作。
  
  最后，个人经验抗生素是没有用的，不要寄希望于那个东西。

• TNT (2012-6-20 12:38:47)

  培养的细胞发生大规模污染，真是损失惨重（主要是时间），特此求助。
  
  污染物为黑色小颗粒，200倍下就能看到，细看下小黑点在抖动。
  似乎与细胞生长有竞争关系，在一株长得比较慢的细胞里，颗粒较多；而在一株生长较旺盛的细胞里，则颗粒较少。
  单独将未加血清的培养基、加血清的培养基置于37°孵育均未见黑色颗粒。
  培养室彻底灭菌后（甲醛熏蒸24hr，培养箱用紫外灭菌），重配培养基，复苏细胞后还是发现黑色颗粒…
  
  到现在还无法进行正常的细胞试验，真是心急如焚啊。向各位高手求救！
  
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  可以尝试下面的操作:
  1.确定不是培养液的问题,至于是否是细胞株的问题先不矛理睬.
  2.将细胞清洗5次后,收集于试管中,1000rpm,5min ,离心.操作5次左右(至少5次以上).
  3.将洗好的细胞转移于一新的培养瓶中再行观察.(注意无菌操作)

• 33号 (2012-6-20 12:39:24)

  我的细胞也是出现这种问题，而培养基并未浑浊，细胞生长缓慢，但是培养基很快变黄（换液第二天）。不知道是怎么回事？
  
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  可能是 培养基pH值偏低
  或培养基中NaHCO3量少不足以起缓冲作用
  或培养箱CO2浓度过高
  
  谢谢各位的解答和建议。
  现在细胞已经恢复了(重新复苏了以前的细胞)，又看到了以前那种熟悉的细胞形态，好亲切的，而且培养液都是那么清亮。

• sunnyB (2012-6-20 12:41:05)

  我的细胞也有小黑点啊，但是都是贴在培养瓶上的，开始以为是培养瓶的问题，又重新泡酸洗了还是有，但是培养瓶养其他细胞又没有。细胞长的也比较慢，长的快的一些瓶黑点就少些。不知道黑点是什么东西？而且最近细胞老是在污染，我不知道和黑点有没有关系。我自认为操作还是没有问题的。我都养了快一年细胞了，从来没有污染过。请指教。
  
  再请教一下，你最后是怎么样解决的呢？谢谢。

• HPLC使者 (2012-6-20 12:41:31)

  
  黑胶虫

• ffooll (2012-6-20 12:42:46)

  
  我也觉得是黑胶虫

• ero11 (2012-6-20 12:43:04)

  
  不一定是污染吧？可以试一下把离心的速度调慢点，多离心几次，说不定杂质就不会一起沉淀下来了。