[求助]MTT试验

最新回复

• tangxin_80 (2012-6-20 12:51:13)

  
  我们做的时候就是直接加，或者就换完全培养基，在加MTT。培养四小时后当然要弃上清了，然后再加DMSO.

• junjie05 (2012-6-20 12:51:32)

  
  我下午做了一次,不换培养基,没有问题

• whitesheep (2012-6-20 12:52:09)

  
  不需要换培养基
  
  4h后要弃上清，贴壁细胞要尽量弃干净，悬浮细胞在不将细胞吸掉的情况下也要尽量吸干净。有些贴壁细胞在加了MTT后，会从壁上掉下来，这时要当作悬浮细胞处理。
  
  在最后加DMSO前，要尽量把培养液弃干净，因为培养液的颜色在检测时也能被测到，为了避免培养液对结果造成影响，要尽量弃去。
  但前提是不能把细胞也一起吸掉，因为这样带来的误差要远远大于培养液没弃干净带来的误差
  所以要在保证细胞不被吸掉的前提下，尽量把培养液吸掉。如果培养液没弃干净，空白孔也要留有等量的培养液，这样在检测时可以尽量去除培养液的影响

• qumm1985 (2012-6-20 12:52:39)

  
  在作细胞实验时一般可以加无血清的培养液作用24h后再加药物作用，这样做是为了使细胞处在血清饥饿状态，主要目的是使细胞同步，这样的结果更具科学性。

• 黄花菜 (2012-6-20 12:53:21)

  
  MTT检测细胞生长
  1．取96孔细胞培养板，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养2～3小时让细胞帖壁（如果是悬浮细胞可直接进行下一步）
  2．用RPMI-1640培养液2～10倍递次稀释细胞因子标准品，根据情况2～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品和待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照孔6个：3个阳性对照孔，每孔加0.1ml含大剂量细胞因子的RPMI-1640培养液，3个阴性对照孔，每孔加0.1ml RPMI-1640培养液。在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24～48小时或预定的时间。
  3．吸去培养液，用PBS洗涤一次（如为悬浮细胞，应在吸去上清液前离心培养板）。
  4．每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液，在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4～6小时。
  5．每孔加0.1ml酸化异丙醇，也可用含10％ SDS的10mmol/L HCl代替酸化异丙醇，在振荡器上振荡混匀，让还原产物充分溶解。置酶联检测仪上测定光密度（OD）值，检测波长570nm，参考波长630nm。以OD值对样品稀释度作图，比较标准曲线和待测样品曲线即可求得待测样品中细胞因子的含量。

• yes4 (2012-6-20 12:54:13)

  只要设有培养液的空白对照就不用弃培养液。

• pencil菲 (2012-6-20 12:54:42)

  MTT检测细胞生长
  1．取96孔细胞培养板，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养2～3小时让细胞帖壁（如果是悬浮细胞可直接进行下一步）
  2．用RPMI-1640培养液2～10倍递次稀释细胞因子标准品，根据情况2～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品和待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照孔6个：3个阳性对照孔，每孔加0.1ml含大剂量细胞因子的RPMI-1640培养液，3个阴性对照孔，每孔加0.1ml RPMI-1640培养液。在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24～48小时或预定的时间。
  3．吸去培养液，用PBS洗涤一次（如为悬浮细胞，应在吸去上清液前离心培养板）。
  4．每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液，在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4～6小时。
  5．每孔加0.1ml酸化异丙醇，也可用含10％ SDS的10mmol/L HCl代替酸化异丙醇，在振荡器上振荡混匀，让还原产物充分溶解。置酶联检测仪上测定光密度（OD）值，检测波长570nm，参考波长630nm。以OD值对样品稀释度作图，比较标准曲线和待测样品曲线即可求得待测样品中细胞因子的含量。
  
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• viviwang1987 (2012-6-20 12:55:02)

  
  如果不是药物实验就不用吸去培养液

• S6044 (2012-6-20 12:55:45)

  
  请问如果用MTT测某种药物的IC50值，需要同时做七块板吗？就是每天测一块板，测一周。还是做一块板就可以了？ 我现在都搞糊涂了。

• ROSE李 (2012-6-20 12:56:37)

  
  不需要做七块板，把你测的细胞吹打下来后直接吸出来，滴加到到一排小杯中（外形与96孔培养板的孔一样，只不过不是一次性的，无需消毒，测完MTT倒掉液体就可以下次再用），将其进行检测，板子上的其余细胞可以继续培养，到第二天再吸取另一排到小杯中检测，依次继续完成全部MTT.

• taoshengyijiu (2012-6-20 12:57:47)

  用DMSO溶解formazan结晶的话，波长应该用570nm，还是490nm？
  我用MTT法测细胞的生长曲线，培养一天的细胞MTT作用四个小时，颜色没有变化，不过还是有吸光值的。
  培养两天的细胞得出的吸光值还没第一天的高呢，是不是细胞死了的原因？
  请大家帮我分析一下吧。

• yhz1973 (2012-6-20 12:58:11)

  
  还有一个问题，对于贴壁细胞而言，药物可以和细胞一起种到96孔板里吗？还是先等到细胞贴壁之后才加药物进去？好像悬浮细胞就是直接加药进去的。

• hold住 (2012-6-20 12:58:37)

  
  我做结肠癌贴壁细胞时，是等24小时细胞贴壁后在加药物。

• moonlight45 (2012-6-20 12:59:30)

  波长应该选择490nm.
  在此由最大吸收