[求助]制作细胞爬片时如何控制细胞的数目

最新回复

• 00无名指00 (2012-6-20 13:34:52)

  
  如果是我来做，会这样来设计：用6cm的培养皿做细胞爬片，6cm皿的底面积是21 cm*2，13mm爬片的面积是1.69 cm*2， 目标细胞数为200-300，即约150个细胞/cm*2。 那么培养皿的总细胞数为150x21＝3150个，传代时取适当的细胞数（3000-4000）充分混匀、均匀接种，第二天换液时爬片上的细胞数就应该在200-300之间了。不知道这种方法是否适合你，共同探讨。

• 兔唇 (2012-6-20 13:35:26)

  没那么严格的，不要太看重数据
  
  做一次就知道了
  
  一般细胞浓度大的话，一滴就够了
  细胞浓度小的话，几滴～十几滴都行
  
  建议消化时把细胞浓度整大点，不然滴数一多，液滴容易侧漏

• dotaaa (2012-6-20 13:35:55)

  
  可以将细胞数调整为6*103，用微量枪滴20ul至玻片上，即可达到所需细胞数。或将细胞数调整为1*104，滴35ul至玻片上亦可。具体可以根据实验，按此方法调整了。

• rxcc33 (2012-6-20 13:36:20)

  没那么严格的，不要太看重数据
  
  做一次就知道了
  
  一般细胞浓度大的话，一滴就够了
  细胞浓度小的话，几滴～十几滴都行
  
  建议消化时把细胞浓度整大点，不然滴数一多，液滴容易侧漏
  
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  楼主 我想问您一下怕片使用铺什么胶？我养的是pc12细胞 贴壁不是太好

• skytree (2012-6-20 13:37:14)

  
  数量不是绝对的啊！另外还要考虑到你的细胞状态，如果细胞长得快可以少加一点，反之可以多加点。
  细胞爬片，我做的时候是将处理好的玻片直接进行爬片，细胞贴的很好。我做的是BGC823 细胞.如果细胞贴壁能力不是很好的话就要先处理一下玻片了。
  另外先在玻片上滴加细胞悬液，等贴壁后(我的做法是过夜)，再继续在空内加培养基使之覆盖玻片，即可。这样做的话玻片上的细胞一方面，浓度会比较高，比较均匀，另一方面利于贴壁。

• owanaka (2012-6-20 13:37:37)

  
  细胞爬片若细胞数太多容易脱片，我们一般是用6孔板做，每个孔加1*105个细胞，将处理好的玻片放在6孔板中，加入培养液（2ml），最后加入细胞悬液即可。

• bananapeople (2012-6-20 13:38:16)

  
  我想请问 各位楼主 波片怎么处理 我如果做tunel 的话 需要怎么处理波片

• owanaka (2012-6-20 13:38:33)

  
  玻片用酸泡一晚上，第二天酒精冲洗，自来水，蒸馏水冲洗后高压灭菌，如果细胞贴壁不太好，可以用多聚赖氨酸泡一下就可以了

• pengke1983 (2012-6-20 13:38:49)

  爬片的细胞数目要求是：你在检测时细胞大约又50％处于融合状态，太多细胞爬片后细胞融合重叠，不利于下一步目标的检测。由于不同类型的细胞生长形态不一，又圆形、椭圆形，梭形等，因此不同细胞在孔板或玻片上占用的表面积当然不同，要达到相同融合状态时细胞数目当然不同。体积小的细胞要求数目多，体积大的数目少。你应该用不同浓度的细胞爬片一次，摸索出合适的爬片密度。关键时检测时细胞在50％融合状态。

• 阿敏 (2012-6-20 13:39:20)

  我想问各位楼主 如果用处理后的波片 做免疫组化的话 细胞是不是会被洗脱啊

• HP007 (2012-6-20 13:39:43)

  
  我是将处理好的盖玻片放在6孔板中，然后直接正常接种细胞，密度的大小根据需要而定。就是往外取片子时不太方便。