[求助]加MTT之前需要把培养液吸弃嘛?

最新回复

• fei1226com (2012-6-21 12:32:13)

  个人主张: 把培养液都吸出来再加MTT
  但细想下各种方法都有其 缺陷的地方
  这也许是MTT不敏感的原因之一

• plaa (2012-6-21 12:32:31)

  不是活的细胞才能还原MTT嘛?如果都吸出来的话,加入MTT孵育那4个小时细胞怎么存活啊?

• ha111 (2012-6-21 12:33:13)

  
  不应该吸出MTT，吸出MTT对最后的结果还是多少有影响的。再说，对于一些细胞来说，4个小时可以有不小的变化，换句话说，加MTT前的活细胞数和4小时后的活细胞数，毕竟有一定差异的。仅供参考！

• one (2012-6-21 12:33:40)

  
  如果你做的药物会与MTT反应，那肯定要把培养液先吸出来。否则，还是不吸出来为妙。

• duoduo (2012-6-21 12:34:37)

  
  首先要明确，吸出培养液再加MTT，实际上是吸出含有药物的培养液，再加入含有MTT的培养液。其实相当于一次换液的过程。
  这个换液的过程有几个好处：
  1。准确限定药物处理时间，因为换液后药物立刻被撤除。而如果直接把MTT加入的话，细胞在一定时间内还存活着，而药物仍然继续发挥作用，这样就很难准确判定药物的处理时间。特别是在一些处理时间仅为几小时的药物，这样的影响就更明显。
  2。避免了各种药物的相互影响。谁也不能保证药物和MTT没有相互作用，毕竟多种不同的药物混在一起。
  
  不换液也有不换液的好处
  多一次操作就多一次产生误差的过程，当用枪吸去原培养液时，难免会有部分细胞被吸掉，这对结果是有很大影响的，特别是对于悬浮细胞。
  
  是否需要换液，要根据不同的细胞和不同的药物来选择，不可一概而论

• cj_mondy (2012-6-21 12:35:03)

  
  个人认为可以在MTT培养的时候不去除，但是在加入溶解液之前去除。这样影响小些。

• 小螺号 (2012-6-21 12:35:34)

  
  这要看你的药物作用的快慢慢了，如果作用慢就不用吸出了，4个小时对他没有影响，如果作用时间短，最好吸出来，以免时间和MTT的影响，做MTT最终是要求药物的IC50,你要本着如何求出的 IC50准确可靠的原则，具体情况具体分析了！

• lixi559 (2012-6-21 12:38:03)

  
  一般加MTT时，不去除上清，而在加入DMSO之前去除上清。

• abc816 (2012-6-21 12:38:21)

  
  关于MTT的实验方法已经有很多帖子了,各种文献中也有描述.
  建议多查资料.
  通常有两种做法:
  1.在药物作用终止前4小时加入MTT,然后继续培养到规定的时间,如24小时.
  2.药物作用时间终止后,弃去培养液,加入MTT继续培养4小时.
  两者在药物作用时间上是一致的,只不过后者要多培养4小时而已.
  个人认为两者差别不大.
  倒是弃去培养液的方法很重要!
  用移液器吸确实容易把细胞吸出,造成误差.
  所以可以用翻板法.

• plaa (2012-6-21 12:38:37)

  
  哦，看来可吸可不吸啊…

• xue258 (2012-6-21 12:39:31)

  
  到底是吸还是不吸？？？？ 急！

• star#room (2012-6-21 12:39:56)

  
  翻版法是不是不用移液枪吸掉培养液，而是把整个板子反过来，甩掉培养液，我试过这种方法，如果板内只有细胞，这样做没问题，要是板内是mtt作用后的蓝色沉淀，好像不行，沉淀会跟着一块一块的脱落。

• bohe221 (2012-6-21 12:40:13)

  我觉得应该吸到培养液 再换成加有MTT的培养基培养4小时