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[求助]MTT的几个头痛问题请教
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我做MTT有一两个月了，但数据都不十分理想，故向请教各位大侠几个问题？（我用的是卵巢癌细胞）
1.铺板时有什么有效的方法才能使个孔均匀一致？如果每加一孔就吹打几次，那细胞会不会受到损伤而影响生长呢？一般要吹打几次开始铺板？加几个孔就要再吹打一次？
2.加入DMSO之前要吸弃上清，以前各位前辈介绍的方法（1.离心后去上清2.倾斜用枪头吸3.铺上滤纸翻转）我试过，但还是有结晶被吸出，我想问一下，如果我不把液体完全吸出，都留10－20ul，然后直接加入过量的DMSO约200ul，这样可以吗？
3.另外我想问一下，肿瘤细胞的接种密度一般是多少每孔?IC50和细胞的接种密度有关系吗？譬如：两次实验分别以10000/孔和5000/孔的密度种植细胞,其他各个条件一样,最后两次的IC50一样吗?如不一样,二者有什么关联吗?
4.铺完板后整块板要再次振荡吗?
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最新回复
sunnyB (2012-6-24 13:16:42)
我一直是铺上滤纸翻转，不会掉下结晶，加一排就应该吹一次吧，要有排枪就好些了，不会损伤细胞的，动作要轻。
铺完后不能震荡了，会把细胞都堆一起的，轻轻放入培养箱
接种一般是2000-6000个/孔都可以把，细胞数不一样，会使药物作用的对象的量的不一致，效果可能会有差别，最好固定
woshituzhu (2012-6-24 13:17:00)
1：加板子时，先加不含细胞的试剂，震荡混匀后加入细胞，不用再震荡，直接培养。加样时一般加一组后吹打混匀一次细胞。
2：我用的是无酚红的培养基，不用吸出培养液，直接加DMSO就可以了！
3：这个不太清楚，抱歉！
66小飞侠 (2012-6-24 13:18:45)
问一下你们一般是做几个复孔啊？我做四个，但是结果有时候误差很大，根本没办法取均值。但是如果多加复孔的话，药又有些不太够，因为药真的很少，要节约点用！
bluelake (2012-6-24 13:19:10)
谢谢各位同仁的指导,吸取众长准备再做一次,我建议楼上的朋友多设几个复孔,我以前是设3个,但有时感觉值好像都不太好,我下次准备设5个复孔这样我想选择余地会大一些
zhenxin (2012-6-24 13:19:57)
另外问一下，你们的复孔之间的差别是多大？用多长的波长来测的？
zhenxin (2012-6-24 13:21:25)
补充两句 关于细胞浓度的
如果你做的药品对细胞具有刺激作用 那么取小点的细胞浓度
如果你做的药品对细胞具有抑制作用 那么取大点的细胞浓度
这样 与对照的区别更明显 数据更好
bluelake (2012-6-24 13:21:41)
我想请教的问题是药物的浓度怎样来定？
尤其是做IC50时，药物梯度该怎样设？
对照组的OD值达多少，说明试验结果比较好？
谢谢大家
zsxan1990 (2012-6-24 13:22:13)
药物梯度如何设，要自己查关于课题方面的文献多参考一下，然后结合自己的实际情况，合理地设置药物浓度。
至于对照组的OD值多少有意义？要和实验组的比较看，因为IC50是50%抑制率，大体上就是对照组OD值一半的那个值。不过准确地要用公式计算，或者用相关的软件。
bluelake (2012-6-24 13:22:33)
拜请大家告知：如何利用MTT获得的IC50值换算成为动物实验所需要的剂量？
bluelake (2012-6-24 13:22:50)
请问MTT结果一定要在0－0.7之间吗？？
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