[求助]请教淋巴细胞增殖问题(MTT不与细胞反应)

最新回复

• DDD (2012-6-24 13:54:17)

  
  是不是淋巴细胞内没有和MTT反应的脱氢酶系啊？好像L929细胞用MTT的方法也不好。你可以用中性红的方法，也是检测细胞增殖的方法，或者用结晶紫的方法（检测蛋白的）这两种方法都很简单，效果也不错，不过结晶紫的灵敏度稍差一点。

• newway (2012-6-24 13:54:42)

  
  不要浪费在MTT上了，人的淋巴细胞增殖用MTT法是很难测出来的。测出来OD值一般很低，另外要求种板技术要绝对好，保证每个孔里的细胞数一样。

• lgm (2012-6-24 13:55:11)

  
  借楼主的光，我培养牛的外周血的淋巴细胞，做了很多次，也是和你一样的情况，更可气的是好几次空白组（不含细胞）的OD值是最高的。我搞不明白是为什么。

• cocacola (2012-6-24 13:55:31)

  
  中性红的方法具体怎么操作呀？

• 园丁## (2012-6-24 13:55:54)

  是不是淋巴细胞内没有和MTT反应的脱氢酶系啊？
  
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  MTT最早就是用于混合淋巴细胞培养，取代3H－Tdr的增殖试验。

• whitesheep (2012-6-24 13:56:21)

  
  我做的是小鼠的淋巴细胞增值，也是这种情况，搞不懂为什么！

• caihong (2012-6-24 13:56:40)

  你加ＭＴＴ前做了一下台盼蓝染色细胞是活的，那时的活力高吗？如果活力不高，那可能你的细胞状态不好．活力很好，那就是你ＭＴＴ的问题了．

• moonlight45 (2012-6-24 13:57:12)

  各位战友，最近做了几次淋巴细胞增殖实验，效果很不理想，希望大家能给指导一下，不胜感激！
  我做的淋巴细胞增殖实验步骤基本上跟以前的各位战友差不多！但我加了ＭＴＴ后没有形成蓝紫色结晶，要不就出现个别孔很黑！
  
  会不会是你加的促使淋巴细胞增殖的药物本身会和MTT起反应啊？
  我也在做，没有出现过孔内液体变黑的情况
  建议将药物和MTT直接反应看看结果
  如果有反应，建议加MTT之前换液
  
  我加了ＭＴＴ培养四小时后在显微镜下观察，细胞形态没有变化还是跟没加ＭＴＴ一样，更没有形成蓝紫色结晶．
  我在加ＭＴＴ前做了一下台盼蓝染色细胞是活的，加了ＭＴＴ４小时我又做了一次台盼蓝染色结果细胞是死的！但细胞形态没有变化啊！
  
  MTT会不会有问题？
  或者MTT和药物反应的产物会不会对细胞有毒性？
  建议同上
  
  用成纤维细胞和骨髓瘤细胞测了一下我的试剂，效果蛮好的，说明试剂没有问题！
  
  这里是指什么试剂？是MTT，还是你的药物加MTT？
  
  我搞不懂怎么回事了，快崩溃了，希望大家帮忙指导一下，谢谢了

• xingyi08 (2012-6-24 13:57:37)

  
  建议用CCK8试剂盒时势

• duoduo (2012-6-24 13:58:00)

  
  有做阳性对照么 conA刺激很明显的啊 没有你实验的具体情况 也不好说是什么原因

• yapuyapu (2012-6-24 13:59:16)

  
  细胞种少了吧
  
  2*106/ml 试试看