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[求助]心肌细胞不搏动

字体: 小中大 | 打印发表于: 2012-6-27 13:03 作者: biabiade 来源: 分析测试百科网

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[求助]心肌细胞不搏动

各位，我养的肉仔鸡心肌细胞不见搏动，新手，很是着急，是所有的心肌细胞都搏动吗？请大侠指点，另外，我觉得心肌细胞和成纤维细胞很难分辨，有什么好的方法可以鉴别吗？先行谢过了。

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最新回复

junhun (2012-6-27 13:04:29)

我养的乳鼠心肌细胞，搏动很好，心肌细胞比较饱满厚实，密度高的话成片搏动有力，成纤维细胞单薄不搏动，仔细分辨可以看出来的，
biabiade (2012-6-27 13:05:00)

QUOTE:
原帖由 junhun 于 2012-6-27 13:04 发表
我养的乳鼠心肌细胞，搏动很好，心肌细胞比较饱满厚实，密度高的话成片搏动有力，成纤维细胞单薄不搏动，仔细分辨可以看出来的，
非常感谢，我还想问一下，培养液中都要加BrdU吗？应该什么时候加？新手，别见笑
junhun (2012-6-27 13:05:26)

我不是什么高手，只是做的比较多而已。Brdu对心肌细胞没有毒性，但是可以有效抑制成纤维细胞增殖，我一般是在接种细胞24h后改为含Brdu的培养液继续培养48-72小时进行下一步实验。不加的话成纤维细胞增殖很快影响心肌细胞生长
yychen (2012-6-27 13:05:47)

brdu可以抑制成纤维细胞?
可以把文献发上来看看吗? 很感兴趣，谢谢!!
zzzz (2012-6-27 13:07:02)

你好，我想问一下，你用的培养基是什么，消化液浓度是多少，方便把你的操作方法传给我吗？我从园子里也查到方法了，可做了以后细胞还是不搏动，很急呀，请支招。
junhun (2012-6-27 13:07:23)

你好，我培养乳鼠心肌细胞，用的是DMEM培养基，胰酶浓度一般0.2%，每次消化8-10分钟，37度摇床，关于取心脏到剪碎等更详细的细节很多文献都有的，你可以查一下。另外，Brdu抑制成纤维细胞生长，很多外文文献都有，输入关键词cardiomyocytes可搜。
yychen (2012-6-27 13:07:49)

QUOTE:
原帖由 junhun 于 2012-6-27 13:07 发表

你好，我培养乳鼠心肌细胞，用的是DMEM培养基，胰酶浓度一般0.2%，每次消化8-10分钟，37度摇床，关于取心脏到剪碎等更详细的细节很多文献都有的，你可以查一下。另外，Brdu抑制成纤维细胞生长，很多外文文献都有，输入关键词cardiomyocy ...
按照你的说法查了一下．没有找到相关文献．能否麻烦您把手头的文献上传一篇？
glass (2012-6-27 13:08:10)

你好，我又按照你的方法做了一次，可2天了根本看不到细胞，能指点我这是为什么吗？还有你用的是哪个公司的胰酶呀，我的胰酶放在4度冰箱里，不知是谁断了电，有一周多的时间，还可以用吗？实在没有办法，帮帮我吗，谢谢了。
junhun (2012-6-27 13:08:41)

Effects of 5-Bromo-2'-deoxyuridine on Beating Heart Cell
Cultures from Neonatal Hamsters
By GERHARD A. COETZEE, DENEYS R. VAN DER WESTHUYZEN
请你自己查查，文件太大没法上传。
我的胰酶是进口的，具体公司没看，你接种时看到圆型细胞了吗？胰酶时间长了，效果也会降低，你的问题比较多，我不能每个环节都帮你考虑周到，建议你从消化到接种都找找原因，一般接种前如果细胞活性好并且没有污染的话，细胞会长的很好，你的细胞看不到可能是细胞消化过头或你吹打过重造成细胞本身死亡，你可以用台盼兰染一下，检查细胞活性可好，想到的就这么多了，原代培养本身就很繁琐，要有耐心，祝你成功！

[ 本帖最后由 junhun 于 2012-6-27 17:07 编辑 ]
biabiade (2012-6-27 17:08:08)

Simpson P，Savion S Differentiation of rat myocytes in single cell
cultures with and without proliferating nonmyocardial cell~ Circ
Res，1982，50(1)：10l_116．还有这篇
jrwyyplt (2012-6-27 17:08:48)

我又养了一次细胞，但还是不理想，我用的是0.08%胰酶，37度消化8分钟，收集每次的细胞悬液，当在显微镜下观察时并不能看到圆形的细胞，只是看到大量血细胞，待培养24小时以后，可以看到杆状，呈梭形的细胞，1-3个核，但细胞不见搏动，下面发一张我养的细胞请指点，很急呀！

86010402.jpg
jrwyyplt (2012-6-27 17:09:04)

再发一张

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