[求助]关于细胞冻存的问题

最新回复

• tieshazhang (2012-6-27 17:26:18)

  
  你的作法完全没问题．
  防护眼罩及手套是国外实验室的标准作法．手套是必须用的，而且要用厚厚的那种．防护眼罩我从来没用过，不过那个东西也很便宜，可以买一个试试.

• hyuu (2012-6-27 17:26:40)

  
  你的冻存夜70%的培养液，20%的血清，10%的DMSO，还可以用甘油来代替DMSO。甘油用时要灭菌。还有在复苏细胞时手套和眼镜都要。有时在复苏细胞是冻存的细胞会爆炸。还是带眼镜比较好。

• minran_1980 (2012-6-27 17:27:03)

  我们冻存液是DMSO10%+90%血清。冻存用专用的冻存管，也不用戴眼镜什么的。不过手套一定要戴不然要被冻伤的。

• junjie05 (2012-6-27 17:27:25)

  我的冻存液用40%的血清，10%DMSO，50%培养液。

• lixi559 (2012-6-27 17:27:46)

  
  你好！我冻细胞一般采用50%的培养液，40%的小牛血清，10%的DMSO（要灭菌），将装好细胞的冻存管放到-70℃作用至少2h，然后转入液氮里。复苏时预先准备37-42℃的蒸馏水，带上厚手套用镊子将冻存管取出，置水中迅速融化，然后转移到培养瓶中即可，次日最好换液，以除去DMSO。

• shenkunjie (2012-6-27 17:28:14)

  
  防护眼罩我从来没用过 但是自己还是小心点好 万一有液氮践到眼睛里 就完了哈

• hyuu (2012-6-27 17:29:04)

  
  细胞复苏时带手套是毫无疑问的，同时还应该才取必要的防护来保护眼睛。因为细胞刚从液氮罐里拿出来是很容易爆炸，虽然威力不是很大，可万一有碎片飞入眼睛里也不是闹着玩的。我就曾经有过这样的经历，因为要看清冻存管内的细胞是否是我需要的，就把眼睛凑到比较近的距离，结果有一支冻存管爆炸了，所幸我是个近视眼，有眼镜的保护。
  
  在实验室工作的各位同志一定要有时刻保护好自身安全的意识啊！

• 49888 (2012-6-27 17:29:29)

  
  DMSO要灭菌吗？本身就是清洁剂呀不可能长菌。

• u234 (2012-6-27 17:29:52)

  二甲基亚砜（DMSO）是一种含硫有机化合物，分子式为（CH3）2SO，常温下为无色无臭的透明液体，具有吸湿性的可燃液体，既有高极性，高沸点，非质子，于水混溶的特性，毒性极低，热稳定性好，能溶于乙醇，丙醇，苯和氯仿等大多、数有机物.
  在细胞冻存中所用的DMSO一般纯度高，无菌，可以直接使用，不需要灭菌的。当然DMSO也可以用高压灭菌后的甘油代替。
  细胞复苏时从液氮罐中取冻存管，有相应的保护措施是十分必要的，我们在平时的实验操作过程中也要加强自我保护意识，养成良好的实验室操作习惯！

• c86v (2012-6-27 17:30:15)

  
  血清浓度是要根据你的细胞来确定的，上面也可以看出，大家什么浓度的都有，你需要自己做一下来确定
  
  至于防护措施，当然是有条件就带上了，我们实验室没有眼镜，我也都是垫层白大褂就上手了，还是注意点好，主要是买合格的冻存管，不然爆炸就惨了

• jrwyyplt (2012-6-27 17:31:01)

  
  实验室一直用corning的冻存管，从来没炸过
  其实感觉也不是太贵，而且，如果实验经费有限，还可以洗干净高压灭菌，反复使用

• zzzz (2012-6-27 17:31:27)

  
  我们是90％的血清加10％DMSO，加的时候迅速振动避免出现絮状沉淀，然后预冷在4度避免室温下DMSO对细胞的损害。
  手套我们实验室用的是鹿皮的，眼镜倒是从来不带，我们实验室名称就叫低温医学研究室，从液氮里捞东西是家常便饭，戴那玩意忒麻烦了。不过我们液氮罐里都有不锈钢的铁抽屉，直接拉出把手来就行了，较简单。

• flower-201 (2012-6-27 17:32:07)

  
  第一.DMSO浓度应在5%——8%，浓度越高对细胞伤害越大。
  第二.必须用标准冻存管不会爆炸，普通EP管放入液氮时一定会炸，因此存放标本也不能用。

• 911 (2012-6-27 17:32:45)

  
  第一，DMSO溶于培养液时会散热，而DMSO在4-8度时对细胞的毒性较低，所以在加入细胞前可先配成20%的冻存液置4度备用；
  第二，在加20%冻存液（加入量与细胞悬液的量等比，使DMSO的最终浓度为10%）时尽量缓慢加入，以尽量降低细胞内外DMSO浓度差过大。当然，有时直接加10%冻存液 也能成功，但有风险；
  第三，DMSO无需除菌。