[求助]流式结果咨询

最新回复

• xueyouzhang (2012-6-28 12:26:19)

  
  我个人认为是不是他建议你把Control的Marker向左移

• hold住 (2012-6-28 12:35:09)

  
  我对流式一窍不通，哪个是maker？为何要移动？对结果影响大吗？
  
  谢谢！

• 园丁## (2012-6-28 12:35:28)

  
  maker就是您的M1。
  左移对con没有什么太大的影响，但是对Sca-1结果影响很大。
  
  看样子这个图是先做的样品marker，然后copy到con上的。这样不科学。
  还是要见con，再sample！

• hold住 (2012-6-28 12:37:03)

  
  谢谢指点，您的意思是我要重新作吗？
  
  我的图是在另外一个大学做得，该单位是我所在城市流式做得最好的地方了。真郁闷。

• xueyouzhang (2012-6-28 12:38:11)

  如果marker左移的话，你右边的样品Gated的值会高的对结果会好一些。但是一般marker标尺都设在100左右。如果Control的Marker向左移的话，可能对右边的样品有影响，可能的假阳性机会大。你可以把Control和样品重叠作图看看。

• hold住 (2012-6-28 12:38:55)

  
  如楼上所言，我的结果不用改，只需要给别人解释一下就行了吗？我真的是一点都不懂，请指教！

• 园丁## (2012-6-28 12:39:44)

  不用重新做了！
  结果重新分析就行！
  
  如果您的试验实在难以在直方图上出现双峰的话，Marker确实不太好画！
  
  在con中，从70荧光道数到110左右都可以作为M1的起始点，都可以说的过去，而且对con的分析结果没有多大的影响。但是由于这一段在样品组里面值很高，左右移动一点都会使得M1的百分比剧烈变化。而您的样品组没有明显分界线，无法给con的Marker提供信息。因此，如果不能继续试验得出好的结果的话，建议在con的那个直方图上用gate使得其右边的数据去除，也就是变干净一点。这样人家就不好说您的M1应该左移了！
  
  最好的方法还是多做几次，尽量按照操作说明上来操作。染色的细胞数量控制好，使得每个细胞都可以获得足够的染色机会，看看能不能让两个峰分开！
  
  好运！

• hold住 (2012-6-28 12:43:41)

  
  看了各位的回帖，有点明白了。
  
  是不是样本的直方图必须是双峰？marker必须在双峰之间？如果要根据con决定marker的话，怎么能确保marker一定在双峰之间呢？又yun了。
  
  能否指点一下图上的标示都是什么意思？
  
  衷心感谢！！

• 园丁## (2012-6-28 12:44:04)

  
  这里高手多了去了，俺只是了解一点点相关知识。
  
  “是不是样本的直方图必须是双峰？”
  多少峰都有可能，呵呵，看上什么了。作为阴阳性标本，最好的结果是非阳即阴，因为它们最好分析。但是有的被标记物质确实不是全或无的表达方式，可能最多就那么多，最少也不太少，那么选取它们作为研究对象或者区分标准就得选择合适的检测方法。流式不是万能的，很多方面都有缺陷。
  
  回到您的试验，如果没有双峰出现，可能意味着一部分或全部细胞中被检测的蛋白的表达比例增高了。如果是这样，就必须科学地分析您的试验结果。在排除了您的试验、操作和上机的问题之后，假设您的试验的结果就是图中那个样子，结合图中数据分析：说明con中M1即Sca-1阳性（荧光强度80以上的细胞）率为1.22%,而试验组中M1即Sca-1阳性（荧光强度80以上的细胞）率为42.37%。
  
  不知清楚了一点没有。

• hold住 (2012-6-28 12:44:37)

  
  对您的描述第三段清楚一点了。第二段...
  
  下面我传两张流式的全图，请您指导
  
  改图的第一排是sca－1，第二排是另外一个抗体。请问第一排的双峰分开了吗？另外，第二排的图怎么和第一排不一样呢？但作流式的老师说也能够说明问题。

  
  58741592.snap.jpg

• idea2011 (2012-6-28 12:46:24)

  
  你直接把control跟Sca-1的圖做overlap就可以很清楚看出來囉

• hold住 (2012-6-28 12:47:48)

  我重叠了一下，还是不知道什么意思？
  难道是把marker定位于红线和绿线交接的地方？

  
  66728684.jpg