[求助]今天做的细胞,帮我看看是什么细胞?



帮我看看这是什么细胞?
单个的 ,和成团的?

这是我下午刚做的肺组织原代培养,用0.1%胶原酶消化了1 个小时,中止后1200r/min 离心5min,取沉淀重悬以后接种的。
感觉单个的细胞贴壁很快,才30min就贴壁了。成团的那些,1个小时以后还没有贴壁。

我需要肺成纤维细胞和肺上皮细胞。

谢谢~~


68969285.jpg


我也来说两句 查看全部回复

最新回复

  • bongte (2012-6-30 09:38:15)

    再附一张图
    谢谢


    97251392.jpg

  • bongte (2012-6-30 09:39:25)


    我感觉肺组织已经洗的发白了
    我先将肺组织剪了以后,然后用D-HANKS液洗,然后离心去掉液体,然后再洗(保持在0-4度)。感觉后来肺已经发白了。觉得红细胞应该很少了。可是这些图看起来,觉得怪。

    谢谢~
  • sunnyB (2012-6-30 09:39:57)


    1 发黄的是红细胞,你确实洗的很干净,红细胞很少了. 但是正常细胞还是太少(体积稍大,发白的那些).
    2 消化到什么程度?组织消失了吗? 37度消化的吗? 胶原酶的浓度有点底,0.2%好一些,消化的时间也短. 应该消化到组织疏松,吹打后大部分组织消失最好.
    3 既然那些细胞团贴壁很慢,反而很可能是你要的上皮细胞.
    4 洗(保持在0-4度), 这个没多大影响,室温即可;红细胞多点少点都不影响结果。
    5 还有你的胶原酶是怎么配的?
  • bongte (2012-6-30 09:40:57)

    本来昨天准备在那个贴子贴的,后来很晚了。
    “发黄的是红细胞,你确实洗的很干净,红细胞很少了”怎么看的出来的?其他的那些细胞,不是红细胞吗?
    而且我感觉很奇怪的就是,按讲应该同时会有成纤维细胞,但是没有看到。今天镜下看,只找到了一处,还不晓得具体是不是。照片稍后贴。
    消化的程度,没有消化到组织完全消失,只是组织变少了,每个小块都有部分变成絮状了
    我的胶原酶是用无血清的MEM配制的
  • sunnyB (2012-6-30 09:41:41)

    两个建议
    1 37度消化2小时,隔半小时吹打一下;
    2 4度过夜,第二天37度继续消化.
  • bongte (2012-6-30 09:42:09)


    这是第2天照的
    谢谢

    单个的细胞很快就铺满了整个孔


    65309447.jpg

  • bongte (2012-6-30 09:42:33)


    再贴一张

    谢谢


    57754655.jpg

  • bongte (2012-6-30 09:42:53)


    这是单个细胞铺满了之后照的

    很奇怪 不知道是什么细胞


    36696457.jpg

  • sunnyB (2012-6-30 09:43:21)


    老兄拍的照片,质量太差了吧.
    你所谓的单个细胞如果是小小圆圆的,不贴壁的话应该是血细胞.培养板底部是否变成红色啦.
  • bongte (2012-6-30 09:43:40)

    呼~~~
    我好不容易拍的
    单个细胞当然贴壁啊 血细胞是不贴壁吗?我不知道 请详解
    不过培养板底部倒是没有变红色 不知道是不是我没经验 看到的不清楚
  • sunnyB (2012-6-30 09:43:57)

    照片应该拍的更好些. 国内一直不太重视照片质量,这个习惯不好.
    红细胞是不贴壁的.但是如果大片的红细胞沉在培养板底部,就会变成红色.
    如果你的照片够清楚,应该能辨认出是否红细胞.