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[求助]今天做的细胞,帮我看看是什么细胞?
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帮我看看这是什么细胞?
单个的 ,和成团的?
这是我下午刚做的肺组织原代培养,用0.1%胶原酶消化了1 个小时,中止后1200r/min 离心5min,取沉淀重悬以后接种的。
感觉单个的细胞贴壁很快,才30min就贴壁了。成团的那些,1个小时以后还没有贴壁。
我需要肺成纤维细胞和肺上皮细胞。
谢谢~~
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最新回复
bongte (2012-6-30 09:38:15)
谢谢
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bongte (2012-6-30 09:39:25)
我感觉肺组织已经洗的发白了
我先将肺组织剪了以后,然后用D-HANKS液洗,然后离心去掉液体,然后再洗(保持在0-4度)。感觉后来肺已经发白了。觉得红细胞应该很少了。可是这些图看起来,觉得怪。
谢谢~
sunnyB (2012-6-30 09:39:57)
1 发黄的是红细胞,你确实洗的很干净,红细胞很少了. 但是正常细胞还是太少(体积稍大,发白的那些).
2 消化到什么程度?组织消失了吗? 37度消化的吗? 胶原酶的浓度有点底,0.2%好一些,消化的时间也短. 应该消化到组织疏松,吹打后大部分组织消失最好.
3 既然那些细胞团贴壁很慢,反而很可能是你要的上皮细胞.
4 洗(保持在0-4度), 这个没多大影响,室温即可;红细胞多点少点都不影响结果。
5 还有你的胶原酶是怎么配的?
bongte (2012-6-30 09:40:57)
“发黄的是红细胞,你确实洗的很干净,红细胞很少了”怎么看的出来的?其他的那些细胞,不是红细胞吗?
而且我感觉很奇怪的就是,按讲应该同时会有成纤维细胞,但是没有看到。今天镜下看,只找到了一处,还不晓得具体是不是。照片稍后贴。
消化的程度,没有消化到组织完全消失,只是组织变少了,每个小块都有部分变成絮状了
我的胶原酶是用无血清的MEM配制的
sunnyB (2012-6-30 09:41:41)
1 37度消化2小时,隔半小时吹打一下;
2 4度过夜,第二天37度继续消化.
bongte (2012-6-30 09:42:09)
这是第2天照的
谢谢
单个的细胞很快就铺满了整个孔
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bongte (2012-6-30 09:42:33)
再贴一张
谢谢
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bongte (2012-6-30 09:42:53)
这是单个细胞铺满了之后照的
很奇怪 不知道是什么细胞
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sunnyB (2012-6-30 09:43:21)
老兄拍的照片,质量太差了吧.
你所谓的单个细胞如果是小小圆圆的,不贴壁的话应该是血细胞.培养板底部是否变成红色啦.
bongte (2012-6-30 09:43:40)
我好不容易拍的
单个细胞当然贴壁啊 血细胞是不贴壁吗?我不知道 请详解
不过培养板底部倒是没有变红色 不知道是不是我没经验 看到的不清楚
sunnyB (2012-6-30 09:43:57)
红细胞是不贴壁的.但是如果大片的红细胞沉在培养板底部,就会变成红色.
如果你的照片够清楚,应该能辨认出是否红细胞.
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