[求助]MTT让我晕？

最新回复

• hyuu (2012-6-30 12:15:13)

  
  我做了一个月,重复无数遍,后来勉强还行.我们这里最牛的是药理的一个做了4个月,呵呵.做实验要慢慢熬的

• eric930 (2012-6-30 12:15:36)

  
  MTT方法很简单，其实并不是影响结果的主要原因，我觉得跟其他一些检测细胞数的方法相比差别并不算是很大，也不算是最好的，但是大家都用这种方法，用的时间都比较长，所以用的比较广泛。你应该看看实验的其他细节吧，比如内皮细胞什么的。我最近做的也是由于细胞（HUVEC）的原因，抑制率做不出来。

• nn255 (2012-6-30 12:15:52)

  
  还是要把具体情况说说，不然大家也只能提建议了！MTT方法比较简单，还要看你的实验设计是什么样的！

• yueban-1147 (2012-6-30 12:16:14)

  
  我也用MTT做HUVEC啊，做的很好啊，抑制率的梯度很明显啊

• 8princess8 (2012-6-30 12:16:37)

  
  我是用LPS10，100，1000，10000，100000ng/ml 作用时间是6，12，18，24h，达到作用时间后，加20ulMTT,四小时后，小心弃掉上清，加DMSO100ul振荡15分钟，酶标仪490nm处测吸光度。我的主要目的是LPS诱导细胞凋亡，我希望测的结果是随着LPS浓度的加大，吸光度月来越低，但是我实际测出的结果是随着LPS浓度的加大，吸光度月来越高。怎么回事ne?给予指点！谢谢！

• is2011 (2012-6-30 12:17:01)

  
  我觉得你可能是细胞铺板不均匀，对结果影响很大。另外，最后吸出加MTT的培养液可能会损失甲襸，做时要注意。建议你用MTS。

• avi317 (2012-6-30 12:17:46)

  有一疑问，为什么细胞在靠近孔边的地方密度比较大那，做了好多次都是如此，会影响试验结果吗/

• kuaizige (2012-6-30 12:18:08)

  1 我们要确定细胞确实有非正常凋亡，如果凋亡量较大的话这点在普通镜下即可看出。
  2 检查使用的培养基特别是自己后来添加的成分，因为有些成分会非特异的与MTT发生显色反应。
  3 加MTT前最好能将孔内细胞清洗一下，以排除不同阶段凋亡细胞与MTT发生显色反应的可能（有些凋亡初期的细胞其线粒体并未完全崩解），虽然这样会损失一点吸光值。
  4 建议先加80微升无血清维持液再加20微升MTT（即稀释5倍），DMSO可多加点，150微升也无妨。
  
  另，孔内细胞密度不均不会对吸光值有太大影响，因为100微升MTT液体足以覆盖孔底（96孔板）。

• 8princess8 (2012-6-30 12:18:34)

  用无血清培养液会影响细胞存活率吗？我记得我前一段时间，用无血清的培养细胞做过MTT。但是在作用12h或者24h后细胞都已经死亡了亚？请问怎么办呢？到底是用什么浓度的血清？怎么才能作出满意的MTT结果啊？