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[求助]为什么我的细胞消化的时候是片状的掉下来？

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2012-7-03 17:40    作者: greenbee    来源: 分析测试百科网

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[求助]为什么我的细胞消化的时候是片状的掉下来？

在开始养原代细胞之前从好心人那里要了点肿瘤细胞准备先练手，但是这几次自己传代时，加入0.25％胰酶后不到30秒，就看到培养瓶底有白色的膜状物漂起来，镜下看到细胞都是成片的被消化下来，吹打后也大多为细胞团。

如果说是消化的时间不够，为什么瓶壁上已经基本没有剩余的细胞了；可是要说消化好了，为什么细胞都是成团分布，有的团还很大？
我养的是肝癌细胞HP-2，长得很快，最近几次传代时，细胞在瓶底已经完全融合了，有的地方甚至长成复层了（如果不是我眼花的话），不知道这是不是原因之一
哪位高手指点一下呀！多谢！
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最新回复

  • fei1226com (2012-7-03 17:40:34)


    个人认为可能是你的PH值偏高了,一般为7.5左右,希望对你有所帮助.

  • greenbee (2012-7-03 17:40:52)


    那是培养液还是胰酶的PH值高了呢？

  • chuntian1983 (2012-7-03 17:41:24)

    我觉得是你的消化液不对。是用PBS配的吗？可以把酶浓度降下来，加EDTA。

  • summerxx (2012-7-03 17:41:57)

    我的胰酶不是自己配的，买实验室现成的，不知道是用什么配的，但是大家都用的是这个呀，没听说别人的也有同样的问题呀？

  • zwsyrt (2012-7-03 17:42:16)


    消化过度会成片掉下来

  • flower-201 (2012-7-03 17:42:40)

    长到70~80就传，别等长满了再传

  • greenbee (2012-7-03 17:43:02)

    我也知道应该不等长满就传代，但是前一次懒了一天它就长满了
    楼上 说得消化过度指的是什么？时间？还是胰酶用量？
    时间－－从加入胰酶到细胞成片掉下，不到一分钟
    胰酶用量－－浓度是0.25％的，加的量也就是1～2ml，刚刚盖满瓶底
    到底问题出在哪里呢？

  • lixi559 (2012-7-03 17:43:35)


    我觉的是胰酶的问题，我有一次消化细胞的时候细胞好像是被撕裂开来的，不是独自变圆的，后来换了胰酶就没这样了，估计你那也是胰酶的问题，建议换胰酶看看，不是再找原因了。

  • gmjghh (2012-7-03 17:43:55)


    肝癌细胞HP-2，我实验室养过，同样用25%的胰酶＋EDTA，消化没有出现楼主的问题。所以请先验证你的试剂是否正确。
    再一点值得注意就是细胞张得比较快，传代时注意不要铺的太满，一般一瓶传三瓶，不急是可传四瓶。张到70-80％就要传代，否则细性状就比较差，而且消化不良，不过一般是不易消化下来。
    另外，消化这个细胞，一般在室温下也要3-5分钟，所以你的e酶很可能有问题（如果你确定细胞没有污染的话，培养基应该是澄清的，而且细胞的形态应该正常）。

  • xevin (2012-7-03 17:45:02)

    多谢各位高手指点，我再好好检查一下我的试剂好了！
    希望能找出问题所在
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