Y盒结合蛋白1单克隆抗体的研制、表位测定及其免疫学应用

摘要：
建立稳定分泌抗人Y盒结合蛋白1单克隆抗体(anti-YB-1 mAb)的杂交瘤细胞株,鉴定其表位与免疫学应用。将重组 YB-1 蛋白免疫 BALB/c 小鼠,取脾细胞与 Sp2/0 骨髓瘤细胞融合。经 ELISA 法筛选鉴定、定株后采用腹水诱生法制备 anti-YB-1 mAb;Protein G 亲和层析法纯化 mAb,ELISA 法测定 mAb 效价、亚型及相对亲和力。采用抗原表位预测法鉴定 anti-YB-1 mAb 识别表位所在区域。Western blot 和免疫组化鉴定 mAb 识别内源性 YB-1 的特异性。经筛选鉴定获得 2 株稳定分泌 anti-YB-1 mAb 的杂交瘤细胞 (1-D9,3-E8);腹水抗体效价均 ≥ 1×10-6,亚型均为 IgGl;1-D9 和 3-E8 单抗识别表位分别位于(134-160aa)与(266-303aa)肽段。Western blot、免疫组化结果证实 anti-YB-1 mAb 能特异性识别内源性 YB-1。该研究为 YB-1 免疫学定性、定量检测方法的建立、肿瘤靶向抗体治疗及进一步探讨 YB-1 的生物学功能奠定了基础。