查看完整版本请点击这里：
[求助]冻存细胞中的问题！
[求助]冻存细胞中的问题！
昨天冻存细胞，离心完后，加入冻存液，吹打使细胞重新悬浮时，发现离心管底的细胞结成片，不易吹打散开。最后不仅吹打出很多泡沫，还有片状细胞团块存在，很郁闷。我离心的条件是1200转/分，10分钟。是不是转速太高。可是我以前一直用的这个转速，并未出现上述情况，请各位大侠给点意见，谢谢
查看完整版本请点击这里：
[求助]冻存细胞中的问题！
[求助]冻存细胞中的问题！
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2012-7-11 14:38 作者: yhz1973 来源: 分析测试百科网
最新回复
911 (2012-7-11 14:38:25)
我们这里1000rpm 3~5min
star#room (2012-7-11 14:39:18)
转速偏高，时间偏长了
xingyi08 (2012-7-11 14:47:53)
我一直用1500rpm,10min离心，冻存的细胞状态很好。建议你离心完倒掉上清后用手指将管底的细胞沉淀弹开后再加冻存液吹打，这样做细胞很容易吹开的。
skytree (2012-7-11 14:48:16)
2541 (2012-7-11 14:49:07)
没有按指南操作.
glass (2012-7-11 14:49:50)
复苏的时候也可以不离心，吸出来放进10ml培养基里就可以了。
yapuyapu (2012-7-11 14:50:17)
1200转/分，3分钟就可以了，你转的时间太长了。这个转速是可以的，很容易吹散细胞的。
abc816 (2012-7-11 14:51:14)
各位大虾，你们复苏的细胞好长不？一般多长时间才能铺满75ML的瓶底？
细胞在形态、活力上有没有改变？
反正我复苏的细胞是成纤维细胞，用的是第二代的细胞，复苏之后，细胞贴壁慢、长的速度也慢，而且长起来的细胞折光度、细胞边缘的光滑度明显降低，请问各位知道原因不？
moonlight45 (2012-7-11 14:58:44)
楼主离心为什么要用这么高的转速，这么长时间？我们一般是800或1000转5min，很好吹散，而且对细胞损伤也小。还有就是楼主是否往离心管里加冻存液太多了，我们一般就是1。5ml，吸管头没在液面下可以避免吹出气泡。
moonlight45 (2012-7-11 14:59:16)
1、收细胞时是否胰酶消化过了，或消化不够使劲吹打对细胞造成机械损伤；
2、冻存时没有按4度30min，－20度2h，然后－80，最后尽快放液氮或－130；
3、楼主的细胞冻存后冰箱内温度是否曾发生很大的波动，对细胞产生了损伤；
4、复苏时是否做到“快”，而且要均匀受热，应完全把冻存管浸入液面下，不要有的地方已经融化，而有的地方还没融。
5、复苏后是否离心弃掉冻存液，更换新鲜培养液。
以上均为个人经验之谈，仅供参考。一般正规操作下复苏的细胞系状态都很好，细胞形态活力没多大影响。但某些娇气的细胞尤其是原代细胞可能会发生改变。鉴于楼主的细胞复苏后状态不好，是不是有以下原因：
1、收细胞时是否胰酶消化过了，或消化不够使劲吹打对细胞造成机械损伤；
2、冻存时没有按4度30min，－20度2h，然后－80，最后尽快放液氮或－130；
3、楼主的细胞冻存后冰箱内温度是否曾发生很大的波动，对细胞产生了损伤；
4、复苏时是否做到“快”，而且要均匀受热，应完全把冻存管浸入液面下，不要有的地方已经融化，而有的地方还没融。
5、复苏后是否离心弃掉冻存液，更换新鲜培养液。
以上均为个人经验之谈，仅供参考。
caihong (2012-7-11 15:00:24)
我们一般都是1000rpm， 10分钟离心
tianmei001 (2012-7-11 15:01:13)
1、每次胰酶我都怕消化过分，所以在消时都只到细胞大部分变圆，就中止，之后就是在尽量吹打，可能有机械损伤。
2、冻的时候我是4度1个小时、-20度过夜、-80度保存，另外在暑假期间，停过电，并且电压经常不稳，低温冰箱长期报警，可能温度上也还是不够。
3、复苏的时候，我事先准备好37c水浴，端到低温冰箱前，取出后立即投入水浴中，并用镊子夹住晃动，使其立即溶解，应该是均匀快速复苏吧。
4、复苏后的细胞我是用6倍体积的培养基加入后离心的
不知道这些方法是不是正确，总之经过11天的复苏细胞现在基本上铺到80%了，但是确实在细胞的光泽感上不如第一代的时候了
caihong (2012-7-11 15:02:04)
jkobn (2012-7-11 15:02:23)
我的是1500，10分钟可还是很容易分散啊
我的是K562白血病悬浮细胞。
[求助]冻存细胞中的问题！