[求助]新手的我养细胞养得要哭了

最新回复

• 爱老虎游tt (2012-7-12 12:46:45)

  我养特娇气的神经母细胞瘤时，也碰到过细胞聚成苔藓样，后来把血清换成15％的胎牛血清，当天就伸展贴壁了。你也可以试试。

• minran_1980 (2012-7-12 12:52:02)

  对，就是苔藓样，可是后来都肿大了，不知青是什么原因？我先试试你的方法，谢谢。

• moonlight45 (2012-7-12 12:52:34)

  
  pH对细胞生长有比较大的影响。我培养过胎羊肺细胞，就发现pH对细胞生长影响比较大。每次检查细胞首先观察细胞瓶pH颜色变化。你可以观察一下你的细胞pH的情况。

• dragonkilly (2012-7-12 12:54:00)

  
  我的情况和你一样也要哭了，我也是从别人拿回来后就不好了，不知道什么原因

• vcve (2012-7-12 12:54:17)

  
  认为是培养皿的事，因为此细胞贴壁不是很好。

• xyw5 (2012-7-12 12:55:34)

  
  没有细胞房怎么 养细胞啊?
  我们的隔离的细胞房一定时间都要 用乳酸熏一次
  细胞培养的细节问题太多,建议每个地方都尽量规范,不然出了问题都不知道是怎么搞的.
  你在其他地方培养都不错,带回来就有问题,很有可能是你们的污染问题.

• caihong (2012-7-12 12:55:50)

  
  用15%-20%的胎牛血清，另外再加入抗生素应该就可以了。
  你的问题可能是细胞到了新环境不适应，所以要多加些胎牛血清，另外没有细胞房就会污染也是原因之一，加入抗生素就可以减轻一些污染了，建设把培养的房间每天用紫外照射40分钟。

• one (2012-7-12 12:57:44)

  
  你的细胞我没有养过，但是就我的经验，分析如下：
  细胞悬在培养液中，应该不是血清问题，我曾经忘加血清过，但是，也都贴在瓶底了，只是不伸展，后来加了血清，就伸展了。
  细胞肿大，是不是培养基问题呢？细胞对培养液中离子、PH很敏感，不知道你们实验室超纯水系统是否正常工作？建议，仔细核对培养液配置过程每一步，还有，装培养液的瓶子是不是第一次用？用之前处理了没有。
  复苏过程应该没失误，我们也是这么做的，只是离心时间5分钟。

• loli (2012-7-12 12:58:00)

  
  请考虑一下水的问题，是否因为你现在用的水跟以前的不同？这很重要，因为细胞也患“水土不服”的毛病。呵呵。

• fklo83 (2012-7-12 12:59:40)

  个人养细胞的经验,供参考:
  我当时也是要养原代细胞的,可是由于条件比较差,没有细胞培养室,各种条件都欠缺的情况下,我和师姐一起共同做了以下的事情
  1. 首先要建立个简易的细胞培养室, 建立的条件参照细胞培养书上写的条件来.
  2. 细胞培养其实不难,关键要作到无污染.这就需要你在细胞培养的时候作到无菌操作.
  3. 细胞培养所需试剂最好分装,长时间应用,多次的暴露,就容易造成试剂的污染.
  4.还要有好的心情,我的学长告诉我,如果你培养细胞时对它的感情很亲切,那么你做事时就很有耐心,也就会做好.

• yueban-1147 (2012-7-12 12:59:57)

  
  没有细胞室超净台也可以的，我们实验室用超净台培养细胞已有三年的历史，只要操作规范还是可以的，只要保证紫外照射三十分钟，每件东西拿进超净台之前擦过酒精棉球，手臂操作之前消毒好，规范操作就好。如果不是培养基和培养皿的问题，我建议你检查一下你的培养箱，温度是否合适，二氧化碳的浓度是否合适，培养箱是否正常运转，我们实验室曾经有过培养箱有问题的经历，一开始就是细胞不怎么长，后来就莫名的死掉，最后才知道是培养箱坏了

• qumm1985 (2012-7-12 13:00:20)

  
  胎牛血清和小牛血清有什么区别呀？

• 二丫头466 (2012-7-12 13:00:38)

  一 293T细胞的复苏：
  1.从液氮罐中取出冻存的细胞快速投入37度温水中让其尽快融化。
  2.用酒精消毒冻存管后开启，将液体移入培养瓶，加含20％小牛血清的DMEM(高糖），37度孵箱培养，6－8小时后观测细胞贴壁，更换培养液。（一般不离心，细胞生长的也不错，离心可能会对细胞有损伤）
  二血清
  良好的培养条件下，细胞并不容易聚集，这是因为血清中含有scatter facters，如hgf等等，会让细胞分散开来。血清中有促贴壁的大分子，如LN，FN等,含量不足，导致细胞的迁移和贴壁能力较差。质量差或者储存不当的血清会出现这样的问题。
  三293T细胞比较的敏感，尤其对于温度，ph值。24小时培养基变黄，一般都是由于污染引起的。
  我的培养条件是这样的，用的是DMEM高糖培养基，含血清10％。消化的时候，要注意的是消化不能过头。一旦细胞变圆，就应该立刻结束消化过程。消化过头,不利于贴壁。

• minran_1980 (2012-7-12 13:01:52)

  
  谢谢大家啦，看了一大通，还是不知道从哪做起！血清是进口的胎牛血清，DMEM是从别人那儿买的（自己配怕出问题），双抗也加了，在其他用地方可以，可以排队以上两个原因。不过如楼上的兄弟说的，培养基一天就变黄了，难道真的污染这么严重？我可是小心又小心了，恼火的是细胞都长成胖子，不知道是啥原因！早上解冻，下班时就成胖子了！如果是培养皿的问题，也不会这么快呀！

• S6044 (2012-7-12 13:02:11)

  
  看看是不是血清的浓度不合适？再有，培养基的ph值也很重要．加入一些HEPES Free acids　看看．

• c86v (2012-7-12 13:02:39)

  
  细胞液是不是配得太碱了.

• bananapeople (2012-7-12 13:03:02)

  可能是水的问题，你赶紧换点好的水吧，重新配各类液体。

• cj_mondy (2012-7-12 13:03:22)

  
  我养过293细胞。293细胞的细胞株很重要，用传代过多的细胞株复苏，养出来的293往往不贴壁，而且病歪歪的。

• TNT (2012-7-12 13:03:44)

  先用你的培养基养一下其他细胞试试，行的话就是你的细胞问题了
  不行的话，重配培养基，水用超纯水，PH值调好，严格过滤除菌。
  培养瓶重新泡酸清洗洗一遍，做到洁净无菌。
  加10%-15%血清配成完全培养基，双抗不加也罢，严格无菌操作，不信细胞就养不好！
  如果你的细胞已经染菌，那就丢掉，换一株吧，时间经不起折腾。

• hustwb (2012-7-12 13:04:29)

  
  你可以换一下你的国产培养皿，我们原来用过国产的，细胞就是不贴壁，还不如用玻璃的效果好。