[求助]293细胞

最新回复

• 49888 (2012-7-12 16:16:27)

  你检查一下培养基的PH值

• gemei0115 (2012-7-12 16:16:46)

  
  293细胞比较娇贵，我养过转染过基因和未转染的293，总的来说，比其他的正常细胞和肿瘤细胞难伺候。你说的情况有可能是消化过度，有细胞碎片产生和细胞损伤存在。建议控制好消化时间，消化液中EDTA浓度可高些，胰酶浓度低些，消化完毕及时终止。
  293细胞贴壁不好，接种时少加鞋培养液可以增加贴壁，一般25cm2加液不要超过5ml，75cm2加10-15ml，225cm2加30ml即可。
  培养液中添加的血清最好能用进口的胎牛血清，56度灭活的。
  培养液的PH值很重要，尤其是传代和复苏时，太碱细胞不易贴壁，生长明显受到影响。

• ququer787 (2012-7-12 16:21:31)

  极有可能是霉菌污染，那些＂小的亮点.很细小,通亮,圆形＂应该是孢子
  可以用上清涂片，美兰单染或结晶紫单染，有可能会看到各种形状的孢子和菌丝

• idea2011 (2012-7-12 16:21:54)

  我的也有这种情况，起初这些亮点大概只有293的几十分之一大，接着会越长越多，最后铺满瓶底，连成片，上面也有成团得悬浮，有老师说可能是球菌的污染，最明显的特征是亮点连成串，改天贴张照片看看

• pengke1983 (2012-7-12 16:22:16)

  
  我现在也在养293,发现细胞里面出现很圆的细胞,比293细胞要小，不像是要死的悬浮293细胞，有的还是两个连在一起,怀疑是霉菌污染,但是量不是很多。细胞状态还好。不知道还有什么补救方法呀！给想想办法呀！

• yueban-1147 (2012-7-12 16:23:07)

  谢谢大家！我将血清换成进口的胎牛血清后，没有出现上述情况。但是，我一用磷酸钙转染，细胞几乎是百分之七十的死亡！唉！我想顺利毕业，有一定的难度啊！

• pengke1983 (2012-7-12 16:24:28)

  
  我也遇到同样的问题,我想应该不是所谓的细菌感染,因为它们并未迅速增加,也不象霉菌感染,但是此状态细胞的确长的慢,我认真分析认为是胰酶消化有点过造成的细胞碎片.

• yueban-1147 (2012-7-12 17:50:46)

  再次求助大家：
  我现在在做293细胞和其他细胞的转染，用的是磷酸钙的方法。但每次转染后细胞死亡很厉害。曾经怀疑是钙和磷酸氢二钠含其他的杂质太多，我换成SIGMA公司的试剂，还是照死不误。质粒提取很好，并用70％的乙醇洗三次的。恳求大家能指点一二！谢谢！

• yueban-1147 (2012-7-12 17:54:13)

  磷酸钙的方法，每一步是按分子克隆书上来操作的。因为细胞死亡太厉害，后续的检测和其他方面的试验都无法往下进行。

• ffooll (2012-7-12 17:54:34)

  
  楼主所说的现象我不是很清楚，好像我没有遇到。我也在养293，可能是消化不好的缘故，消化后的细胞不能均匀铺底，成簇状分布。这样，周围的细胞有生长的空间，可以正常增值，但是中心的细胞因为没有空间，经常都会出现空泡样的形状，我想可能是细胞老化。另为，这样的细胞传代后，会出现成片悬浮的情况，这是和污染不一样的，因为成片悬浮的细胞还是可以看到细胞形态的，只要你调一下显微镜的焦距。另外，如果怀疑是污染，可以拿一瓶细胞或培养细胞的上清液留样培养，没有污染的培养液应该始终是澄清的，尽管颜色会变黄。