杜立林实验室PLoS Genet解答谜题

来自北京生命科学研究所，中国农业大学，美国Scripps研究院等处的研究人员发表了题为“Phosphorylation-Dependent Interactions between Crb2 and Chk1 Are Essential for DNA Damage Checkpoint”的文章，解答了关于DNA损伤检验点通路Crb2参与激活Chk1的分子机理，相关成果公布在《PLoS Genetics》上。生物通 www.ebiotrade.com
文章的通讯作者是北京生命科学研究所杜立林研究员，其早年毕业于南开大学生物系，2007年加入北京生命科学研究所。第一作者是博士生曲萌，其他作者包括北京生命科学研究所的董梦秋博士，董梦秋实验室的博士生杨兵和陶莉，以及美国Scripps研究所的Paul Russell博士和John R. Yates III博士。
为确保基因组的稳定性，真核细胞中存在一套监控DNA完整性并传递DNA损伤信号的系统，称为 DNA损伤检验点通路。参与该信号传导通路的蛋白包括识别DNA损伤的感应蛋白，下游的效应激酶，还有介导感应蛋白与效应激酶间信号传导的中介蛋白。Chk1是最重要的效应激酶之一，在真核生物中高度保守。在模式生物裂殖酵母中，中介蛋白Crb2对效应激酶Chk1的激活至关重要，但是Crb2参与激活Chk1的分子机理却并不清楚。生物通 www.ebiotrade.com
这篇文章对这一问题进行了研究，研究人员发现Crb2上的两个磷酸化位点（T73和S80）对于Chk1在DNA损伤部位的聚集和Chk1的激活是必需的。一个包含这两个磷酸化位点的19个氨基酸的肽段可以在体外与Chk1直接结合。通过将这一肽段定位在DNA损伤部位，本论文证明了Crb2和另一个中介蛋白复合体Rad9-Rad1-Hus1 (9-1-1)的主要作用是将Chk1募集到DNA损伤部位。
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杜立林研究主要从事DNA双链断裂的修复机制，对基因组中脆弱位点的研究，以及高通量表型组的分析，其实验室曾构建了可用于裂殖酵母的高效插入诱变工具，为这一领域的研究提供了新工具。
研究人员运用高通量测序技术分析了大量的转座子插入位置，发现在该系统中，PB转座没有明显的染色体偏好性。利用此诱变系统，他们筛选到位于klp5, klp6和dam1的能够增强细胞对微管解聚药物thiabendazole的抵抗性的PB插入突变。在另一个遗传筛选中，研究人员发现在wee1基因中插入PB能够抑制温度敏感突变cdc25-22的致死表型。在这两个筛选中，研究人员得到了所有预期的突变基因，体现了该PB诱变系统的实用价值。