[求助]铺板不均,急!

最新回复

• 131415 (2012-7-17 17:01:49)

  
  可以看看这个帖，也许有帮助
  cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=76&id=6574363&sty=1')

• zzzz (2012-7-17 17:02:12)

  你原来的问题解决了吗?你是采用这个方法吗?
  一定要注意接种好细胞后不要再摇晃了。可按下面方法操作，一定有效的，因为这是我从失败中总结的教训。
  
  你可以先将消化好的细胞放入离心管或小的DISH中，用移液管或枪头吹散，（如有排检可用排枪，使DISH中的细胞分散均匀），然后用枪取你需要的量直接加入24孔板中，在显微镜下观察，细胞分散非常均匀。
  在加入24孔板前，细胞一定要混合均匀，这样还会保证你加的几个孔中细胞密度差不多。
  
  切记：不要摇晃了，否则细胞会聚集到中央。

• star#room (2012-7-17 17:02:32)

  用酶标仪的震荡器

• 生物迷 (2012-7-17 17:02:55)

  
  经典十字晃，我从失败中得出的经验。放入孵箱前，前后和左右摇晃几下，水平缓慢放入。
  
  试过再说效果！

• jujuba (2012-7-17 17:03:23)

  
  我们实验室老师教的：要么只前后晃，要么只左右晃，万不可转圈，可以拿大米在锅里先试一下，呵呵， 你会找到答案的

• ffooll (2012-7-17 17:05:32)

  
  我在铺96孔板时也出现铺板不均的问题，不知有哪些注意点，请教各位

• utt0989 (2012-7-17 17:06:05)

  我们实验室老师教的：要么只前后晃，要么只左右晃，万不可转圈，可以拿大米在锅里先试一下，呵呵， 你会找到答案的
  
  ----------------------------------------
  
  呵呵,有意思,跟做操样的

• lagua123 (2012-7-17 17:06:29)

  关于接种，我是这样处理的：将吹打下来的细胞（贴壁细胞）转入离心管离心后，加适量（少量）培养基吹打均匀后，计数，按10*5cell/ml(96孔)计算稀释倍数，要加几块板，就先将大浓度的细胞液平分为几份，然后再按每板需加细胞液的量稀释，并且在所有分液、稀释和加孔过程中，要用枪不停的吹打以确保细胞在培养液中均匀分布。举例说明：比如我想加三块96板，选一瓶张满的细胞，把它吹打下来后，先加3ml 培养基吹打均匀后计数
  （多次准确），结果发现稀释30倍后可达10*5cell/ml，于是将这3ml细胞液均分到3 个离心管里，再分别加9ml 培养液，就稀释好了，而这10ml正好够我加一个板，整个过程注意不断吹打

• fklo83 (2012-7-17 17:21:49)

  
  把枪头的尖子剪掉也有帮助哦！

• wu11998866 (2012-7-17 17:29:57)

  
  我把我的一点经验与大家探讨：
  
  我做的是MG63细胞（注：用Bechmen的Vi－cell测量，我的细胞直径在20um左右，消化后成典型的球形 ），经过多次反复试验，我发现对于我的细胞：
  
  1 只有“经典十字晃”管用，最好是先把细胞用培养基稀释，然后直接入孔
  
  2 zlc54 的方法对于我的细胞没有用，细胞仍堆积在中央。我试了两种改良：A，先加细胞入孔，然后加培养基至500ul；B，先把细胞用培养基稀释，然后直接入孔。两种方法都不晃，结果都没有改观
  
  3 一般六孔板很容易比24孔板细胞分布均匀

• mamamiya (2012-7-17 17:30:19)

  我现在也在铺6孔板和96孔板，对于6孔板而言，我是选择一瓶或者两瓶长得比较满的细胞，先胰酶消化，加入10ml含血清的培养基吹打、计数细胞数为10×4～10×5个/ml，每孔用刻度吸管加2ml，并且在每一次分配细胞前，不断的吹打混匀。后来观察每孔的细胞分布还比较均匀。
  但是只做了一次96孔板的细胞种植，当时把细胞数调大 了，加上我的细胞当时生长比较快，导致最后的结果反过来了，郁闷至极。
  现在觉得对于生长比较快的细胞，不管是那种板，我建议种植密度在5×104～105/ml，这样培养24h后才不至于出现细胞把整个孔内都占满了，甚至于堆积，对结果产生副作用。
  一家之言，仅供参考。