[求助]细胞贴壁消化不下来

最新回复

• cj_mondy (2012-7-20 13:17:17)

  
  我们实验室全部都用玻璃培养瓶的，因为塑料与细胞的粘连是非常严重的，推测可能是细胞膜蛋白与聚苯乙烯类的吸附作用较强

• yapuyapu (2012-7-20 13:17:40)

  
  可以用cell scraper

• hold住 (2012-7-20 13:17:59)

  
  Hela应该还是比较容易消化的，我觉得问题可能在于你的酶活力不足。建议适当提高浓度看看，增大吹打力度，或者用力震荡瓶子。

• duoduo (2012-7-20 13:18:18)

  
  我通常是把细胞放到培养箱内3分钟左右，基本都可以消化下来。

• duoduo (2012-7-20 13:18:43)

  
  塑料培养瓶上有促贴壁的物质，而玻璃瓶没有，用同样的消化液来消化，肯定是玻璃瓶上的细胞先脱落的。如果贴壁太牢，建议提高胰酶的浓度。

• ending (2012-7-20 13:19:06)

  
  Hela细胞是比较好消化的，我以前也是在塑料瓶养过，如果胰酶4度左右大约消化5分钟， 如果快到室温，2分钟就可以了。我想加上EDTA的消化时间应该更短。如果你要消化30分钟，可能你的胰酶效价有问题。该不会是在4度时间长了吧？或者反复冻溶？我想不会吧。建议你用0.5%的胰酶消化，不用加EDTA，Hela没有聚集性，EDTA有一定的毒性。

• S6044 (2012-7-20 13:19:28)

  
  建议：（1）胰酶和EDTA消化液水浴中预热到37℃，达到酶活力最适温度；
  （2）消化细胞时，先到去旧培养基，用PBS洗1～2遍，去处血清，以免影响胰酶活性；
  （3）加消化液后放置在培养箱中，一般3～5分钟，时间太久损伤细胞，原理同（1）；
  （4）镜下观察，细胞伪足收缩，变圆，细胞间距离增大，用手拍打培养瓶再观察细胞分散悬浮后即可加少量含血清培养基终止消化。

• 二丫头466 (2012-7-20 13:19:49)

  
  胰酶浓度
  胰酶温度