[求助]如何从９６孔培养板内刮下细胞？用什么工具？

最新回复

• milkdog (2012-7-21 11:43:32)

  
  一般情况下细胞在一次性培养瓶或培养板中贴壁较紧，都不太好消化，如果建系的话最好不用刮的方法，还是消化比较好！消化时以下几点注意了吗？
  消化前用D-Hanks冲洗了吗？可以冲洗2-3遍.
  适当增加胰酶浓度，提高胰酶PH值到8，减少消化时间应该对细胞影响不大。
  消化时放入37度。
  如果细胞还是消化不下来可加适量胶原酶，有的细胞对胶原酶敏感。

• sunnyB (2012-7-21 11:44:13)

  市场上有买细胞刮刀,但是我用过的型号不适用与96孔. 我在做96孔单克隆时 一般采用酶消化法. 同意上楼的说法,消化前将细胞用D-Hanks冲洗,有助与消化,另外胰酶的最佳消化条件是 pH 8.0,37度最好. 如果效果还是不太好的话,可以采用多次消化方法.

• greenbee (2012-7-21 11:44:30)

  
  建系的话用24孔就可以了阿，干吗非用96孔的。那么小。做western检验都不够。

• 分子式 (2012-7-21 11:44:57)

  
  非常赞同楼上几位。谢谢了。但是，it is better to use 96-well plate if you want to do limited dilution.

• greenbee (2012-7-21 11:45:15)

  
  建系的话当然是要用96孔板的啊！24孔板恐怕不够用.

• 分子式 (2012-7-21 11:45:35)

  -Hanks和PBS冲洗效果有何不同？我在胰酶消化前一直用PBS冲洗.

• 分子式 (2012-7-21 11:45:56)

  
  Question for liujian and szy350121: should I wash cells after trypsinization? Usually I
  do it when I am harvesting cells from Petri-dishes/flasks. (Trypsinization-neutralization-wash). I am wondering how can I wash such tiny amount of cells harvested from 96-
  well plate.
  
  I think it is a good idea to neutralize the trpsinized cells with FBS and without wash.
  What do you think?

• greenbee (2012-7-21 11:46:18)

  
  首先，D-Hanks和PBS冲洗细胞都可以的，我两种都用过，不过严格来说我认为D-Hanks更好，因为我们的胰酶是用D-Hanks溶的，所以用D-Hanks不改变胰酶的消化环境。
  
  第二个问题，完全可以不用wash，加入带血清的培养基之后胰酶将完全没有作用，我一般都是这样做的，但是如果EDTA浓度太高的话就需要wash了！

• toy (2012-7-21 11:46:38)

  do you know Herman Vandenburgh?

• 分子式 (2012-7-21 11:46:56)

  
  cuturl('http://bms.brown.edu/mppb/abc/vandenburgh/index.html')